长链非编码RNALINC00675靶向miR-942-5p/GFI1抑制肝细胞癌的机制研究（联合资助培育项目）

科技成果来源：百色科技成果库;
地区：广西-百色;
成果名称：长链非编码RNALINC00675靶向miR9425p/GFI1抑制肝细胞癌的机制研究（联合资助培育项目）
推荐部门：百色市科学技术局
第一完成单位：右江民族医学院
主要完成单位：右江民族医学院
主要完成人员：汪建初,李曙波,李文川,张英,姚天尉,汪伟,陈鹏宇,陆礼柏
科技成果登记号：2022F102J006050
登记日期：20221108
成果简介：
一、项目研究的背景及意义lncRNAs可以通过与DNA、RNA和蛋白质相互作用来促进癌症表型，在HCC进展中表现出重要作用。LINC00675被报道参与多种恶性肿瘤的发生发展，但其作为ceRNA通过RNARNA调控肿瘤的发生及转归鲜有报道，在HCC中的表达及调控作用尚不可知。我们前期研究发现，LINC00675在HCC细胞及癌组织中的表达明显下调；LINC00675能够抑制HCC细胞生长、侵袭及转移；下调miR9425p能够显著抑制HCC细胞的增殖、侵袭与迁移；LINC00675能够通过竞争性结合miR9425p抑制HCC细胞的增殖、侵袭与迁移；生物信息学分析显示：miR9425p能够特异性识别结合独立生长因子1（Growth factor independent 1,GFI1）的3’UTR序列，提示转录抑制因子GFI1可能是miR9425p的靶基因，miR9425p能够靶向调控GFI1。本课题衔接前期的工作基础，通过体内外机制及功能实验，验证LINC00675/miR9425p/GFI1之间的调控关系，并通过建立HCC动物模型探索和开发基于LINC00675/miR9425p/GFI1调控网络的HCC诊断与靶向治疗的优化策略。二、主要论点与论据1.LINC00675、GFI1在HCC中下调，miR9425p在HCC中上调。LINC00675在HCC细胞中的表达下调；GFI1在HCC细胞中下调，晚期HCC、具有淋巴转移的HCC组织中GFI1下调的更明显。miR9425p是LINC00675的调控靶基因。LINC00675与miR9425p在HCC细胞中的表达呈负性相关。LINC00675与miR9425p存在结合位点，miR9425p能够结合LINC00675特定序列；转录因子GFI1调节LINC00675，通过GFI1 siRNA转染HCC细胞使GFI1表达降低，发现LINC00675表达显著减少；荧光素酶报告基因检测技术明确GFI1使miR9425p的调控靶基因，在SMCC7721细胞中，与miR9245p抑制剂共转染的WTGFI1表达上调，而加入了miR9245p模拟物的HCC细胞中GFI1下调。2.LINC00675、GFI1的上调与miR9425p下调抑制HCC细胞的进展。构建过表达LINC00675的HCC细胞，EdU实验表明QGY7703、SMCC7721细胞增殖受抑制，并且细胞凋亡明显且HCC细胞在G1期的分布被LINC00675显著阻断，HCC细胞的迁移与侵袭明显减弱。建立miR9425p与GFI1过表达转染HCC细胞模型，发现miR9425p上调使HCC细胞增殖增强的情况被GFI1过表达逆转，GFI1上调使HCC细胞的凋亡明显上调， miR9425p上调使HCC细胞迁移及侵袭增强的现象经GFI1过表达逆转。建立LINC00675低表达模型。发现，LINC00675低表达使GFI1的表达显著降低，使miR9425p表达上调，加入miR9425p抑制剂后LINC00675表达增加。此外，LINC00675低表达使HCC细胞活动增加，加入miR9425p抑制剂后HCC细胞活动减弱。3.构建LINC00675过表达的裸鼠皮下荷瘤模型。发现LINC00675过表达的小鼠HCC转移性肺结节数量减少；肺组织中LINC00675与GFI1的表达上调。4. 开展肝脏创新技术的临床研究。探究了左侧卧位腹腔镜手术处理肝右后叶外伤的可行性及安全性，证实该方法具有暴露好、修复方便、二次损伤小、住院时间短等优点。比较了Pringle法与Glisson鞘外离断法在腹腔镜肝血管瘤切除术中的临床疗效，说明Glisson鞘外离断法行腹腔镜肝血管瘤切除术过程中具有操作简单、出血量少、肝功能损伤小及住院时间短等优点，且安全性较好。5.本项目结论：LINC00675 通过 ceRNA 机制内源性竞争miR9425p，进而影响 HCC 的发生与发展。LINC00675通过靶向miR9425p 调控 GFI1的表达，竞争性抑制 miR9425p促进肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移的作用；而转录因子GFI1能调控LINC00675 和miR9425p的表达，参与HCC 的发生及进展。明确了LINC00675/miR9425p/GFI1 之间的调控关系，完成初步探索HCC发生发展过程中ceRNA分子调控机制，为HCC的诊断、治疗及预后评估筛选理想生物标记物提供了有利的帮助。三、创新之处1.分析了 LINC00675/miR9425p/GFI1在HCC中的表达及相关性。2.明确了LINC00675/miR9425p/GFI1 之间的调控关系及对 HCC 生长与转移的调控作用。3.开发了基于 LINC00675/miR9425p/GFI1的HCC 基因诊断与靶向治疗的优化策略。4. 开展肝脏创新技术的临床研究。本研究着眼于探索 ceRNA 在 HCC 中的调控机制，为现有的 HCC 发生、发展机制研究提供理论补充，为HCC 的诊断与靶向治疗筛选新的生物标志物提供了参考依据。四、社会经济效益本项目较好地完成了预期目标。本研究明确了LINC00675/miR9425p/GFI1 之间的调控关系，并通过建立 HCC 动物模型，探索了基于 LINC00675/miR9425p/GFI1 调控网络的HCC诊断与靶向治疗的优化策略。已圆满完成初步探索HCC发生发展过程中ceRNA分子调控机制，为HCC的诊断、治疗及预后评估筛选理想生物标记物提供了有利的帮助。项目实施过程提高了2名中青年教师和2名硕士生科研理论知识和科研实践能力，为提升肝胆外科整体科研水平做出了一定的贡献。
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