抗食源性弯曲杆菌噬菌体的筛选及应用

科技成果来源：商丘科技成果库;
地区：河南-商丘;
科技成果名称：抗食源性弯曲杆菌噬菌体的筛选及应用
成果所有人：商丘师范学院
成果简介：弯曲杆菌病是目前世界上最常见的食源性人畜共患病之一。人主要通过食入被弯曲杆菌污染的肉制品、水和牛奶，或接触带菌的畜禽活体而感染。该菌普遍存在于家禽胴体、肠道及粪便中。消费者、销售人员和屠宰加工人员可通过接触活禽、加工制品、食用未完全煮熟的禽肉或饮用被污染的水而感染弯曲杆菌。因此，减少或清除家禽体内定植的弯曲杆菌可有效控制人食源性感染弯曲杆菌病的发生率。但特异性弯曲杆菌噬菌体的筛选方法及在肉鸡生产中的应用方案还需要进一步研究。该项目以肉鸡屠宰场及其附近污水处理厂收集到的抗弯曲杆菌噬菌体为研究对象，分析抗弯曲杆菌噬菌体的生物学特性，筛选裂解谱广、裂解率高的特异性噬菌体。对优势噬菌体进行肉鸡喂养试验，通过测定噬菌体对肉鸡肠道弯曲杆菌的清除率及对肉鸡生长性能和屠宰指标的影响，优化抗弯曲杆菌噬菌体在肉鸡生产中的应用方案。研究结果：① 以空肠弯曲杆菌L26为宿主菌共分离到12株抗空肠弯曲杆菌噬菌体。依据噬菌斑的形态特征，将其分别命名为BP1～BP12。选择噬菌斑大且清亮的BP5～BP12分别与从当地肉鸡养殖场分离获得的7株空肠弯曲杆菌共孵育，发现噬菌体BP5～BP10仅能在3～4株共孵育的空肠弯曲杆菌培养平板上形成噬菌斑，而BP11和BP12均可裂解6株共孵育的空肠弯曲杆菌，且噬菌斑直径均在2.2 mm以上，因此选取裂解谱广且噬菌斑大的BP11和BP12进行纯化和增殖。② 选择30个基因型空肠弯曲杆菌菌株作为宿主菌进行噬菌体裂解谱分析。BP11和BP12显示出较宽的裂解谱，裂解率分别为70.0%（21/30）66.7%（20/30）但二者对相同宿主菌的裂解能力具有差异性。将浓缩、纯化后的噬菌体BP11和BP12经负染后于电镜下观察，发现2种噬菌体均具有一个二十面体头部，外无囊膜；一个可收缩的尾部，尾部末端具有短棘和长鞭毛。按国际病毒分类委员会分类标准，符合肌尾噬菌体科特征。BP11和BP12分别在与空肠弯曲杆菌L26共孵育的第6 h和第8 h末消减该弯曲杆菌3lg CFU/mL左右。随后，弯曲杆菌的活菌计数值又逐渐上升，但在第12 h末活菌计数值均显著低于未被噬菌体侵染的阴性对照组。该结果表明噬菌体BP11和BP12可有效抑制弯曲杆菌的增殖。③ 空肠弯曲杆菌攻毒组随机选取的6只肉鸡盲肠内容物均检测出空肠弯曲杆菌，表明空肠弯曲杆菌感染肉鸡模型已成功构建。由弯曲杆菌活菌数与噬菌体添加量拟合曲线可知，BP11和BP12随添加量的升高其抑菌效率逐渐增强，BP11的1×10^9和5×10^9 PFU/d 2个剂量的抑菌效果差异不显著；BP12的1×10^9和5×10^9 PFU/d 2个剂量组与5×10^8 PFU/d剂量组比差异不显著。考虑抑菌效果及成本因素，确定BP11和BP12的适宜添加量分别为1×10^9和5×10^8 PFU/d。④ 肉鸡泄殖腔粪便弯曲杆菌携带量的计数结果显示，与对照组相比，BP12从添加48 h开始粪便内弯曲杆菌数显著降低，72 h时可降低1lg CFU/g以上。而BP11未产生显著差异。BP11+BP12混合添加组72 h可使粪便内弯曲杆菌数降低3lg CFU/g以上。屠宰前各组粪便弯曲杆菌数均有上升的趋势，但混合添加组弯曲杆菌数仍显著低于对照组及2个单独添加组。生长指标检测结果显示，与对照组及单独添加BP11组相比，BP11+BP12混合添加组的ADG、ADFI显著升高，F/G显著降低；与单独添加BP12组相比较，BP11+BP12混合添加组的ADFI差异不显著，ADG显著升高、F/G显著降低。屠宰指标检测结果显示，BP11添加组与对照组差异不显著；BP11+BP12混合添加组除全净膛率显著高于对照组及BP11添加组外，其他屠宰指标差异均不显著。上述结果表明BP11+BP12混合添加组在不影响屠宰指标的前提下可显著降低肉鸡泄殖腔弯曲杆菌携带量。研究建立的特异性噬菌体的筛选方法及在肉鸡弯曲杆菌控制中的合理应用为控制肉鸡弯曲杆菌感染率和人食源性弯曲杆菌感染率提供理论依据。
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