糖类抗原CA72-4的检测试剂盒实用新型专利

专利名称：糖类抗原CA72-4的检测试剂盒

专利类型：实用新型专利

专利申请号：CN202111594547.5

专利申请（专利权）人：北京九强生物技术股份有限公司
权利人地址：北京市海淀区花园东路15号旷怡大厦5层

专利发明（设计）人：程红党,果玮,刘瑶,刘希

专利摘要：本申请涉及糖类抗原CA72‑4的检测试剂盒。该试剂盒包含第一试剂、第二试剂和任选地校准品。第一试剂包含缓冲液、分散剂、促凝剂、阻断剂、表面活性剂和防腐剂；第二试剂包含缓冲液、CA72‑4抗体包被的胶乳微球、蔗糖、酪蛋白、防腐剂。本申请的试剂盒准确性、线性、精密度和稳定良好。

主权利要求：
1.一种用于确定CA72‑4水平的试剂盒，其包含：第一试剂、和
第二试剂；
其中，所述第一试剂包含：
所述第二试剂包含：
所述分散剂选自以下任一项或组合：氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、硫酸镁；
所述促聚剂选自以下任一项或组合：聚乙烯吡咯烷酮、PEG12000、PEG8000、PEG6000；
所述防腐剂选自以下任一项或组合：叠氮钠、PC300、山梨酸、苯甲酸；
所述阻断剂是HIER‑E‑010D；
所述表面活性剂是二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚。
2.根据权利要求1所述的用于确定CA72‑4水平的试剂盒，所述第一试剂不包含BSA。
3.根据权利要求1所述的用于确定CA72‑4水平的试剂盒，所述第一试剂包含：
4.根据权利要求1或3所述的用于确定CA72‑4水平的试剂盒，所述第二试剂包含：
5.根据权利要求1或3所述的用于确定CA72‑4水平的试剂盒，所述促聚剂是聚乙烯吡咯烷酮。
6.根据权利要求5所述的用于确定CA72‑4水平的试剂盒，所述聚乙烯吡咯烷酮是PVP360000。
7.根据权利要求1所述的用于确定CA72‑4水平的试剂盒，所述CA72‑4抗体源自以下的一种或组合：鼠、兔、羊、禽、骆驼、人工重组。
8.根据权利要求1所述的用于确定CA72‑4水平的试剂盒，其中：所述胶乳微球是聚苯乙烯胶乳微球；
所述胶乳微球的表面修饰有选自以下的任一基团或组合：羧基、氨基、巯基、羟基；
所述胶乳微球的平均粒径是100nm至350nm。
9.根据权利要求1所述的用于确定CA72‑4水平的试剂盒，所述防腐剂是叠氮钠。
10.根据权利要求1所述的用于确定CA72‑4水平的试剂盒，还包含校准品和/或质控品。 说明书 : 糖类抗原CA72‑4的检测试剂盒技术领域[0001] 本公开涉及医学、免疫和体外诊断领域；具体涉及一种免疫透射比浊法的糖链抗原72‑4(CA72‑4)的检测试剂盒。背景技术[0002] CA72‑4是由cc49和B72.3两株单抗识别的黏蛋白类的糖类抗原。CA72‑4分子量为220kD至400kD。它是在1981年由Colcher等通过乳腺癌的肝转移病区的癌细胞膜成分免疫小鼠得到的IgG单克隆抗体，能够识别TAG72蛋白。[0003] CA72‑4可存在于胃癌、结直肠癌、乳腺癌等的恶性组织中，但在非上皮性的恶性肿瘤及良性增殖性病变中无该抗原的表达。因此，诊断恶性肿瘤的特异性更强。近年来，CA72‑4已被应用于临床用来检测胃癌、卵巢癌、结直肠癌、非小细胞肺癌等疾病的诊断。[0004] CA72‑4目前的检测方法学集中在化学发光平台和酶联免疫平台。检测方法如下主要有：电化学发光法、磁微粒化学发光法、酶联免疫法(DRGInstrumentsGmbH德国)。[0005] 例如，CN102288767A公开了一种CA72‑4的定量测定试剂盒，其包含CA72‑4磁分离试剂、酶反应物、反应增强剂、稀释液。[0006] CN104931703A提供一种CA72‑4的免疫磁珠试纸条，所述试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和背衬板；试纸条上标记有抗CA72‑4单克隆抗体CC49和抗CA72‑4单克隆抗体B72.3。通过所述试纸条进行免疫层析后，用磁强度检测仪分析获得CA72‑4的定量结果。[0007] CN105092852A提供一种检测CA72‑4的荧光免疫试纸条，所述试纸条包括样品垫、量子点标记结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸；所述量子点标记结合垫上设置有量子点标记的抗CA72‑4单克隆抗体CC49涂层；检测线上设置有抗CA72‑4单克隆抗体B72.3。通过所述试纸条进行免疫层析后，用荧光免疫层析芯片检测仪分析获得CA72‑4的定量结果。[0008] 化学发光法灵敏度高、特异性强、精密度好，但试剂及配套仪器价格昂贵、检测通量小，不适用于基层医院。随着分级医疗政策的推行，基层医院患者流量增大，但基层医院对成本控制依然比较敏感。[0009] 因此，很有必要开发一种可定量的、适用于普通生化分析仪的高通量的CA72‑4检测试剂。发明内容[0010] 根据一些实施方案，提供了一种用于确定CA72‑4水平的试剂盒，其包含第一试剂和第二试剂。[0011] 本申请中，CA72‑4是指人CA72‑4。该术语包括CA72‑4在体内整个周期各阶段中的各种形式分子，例如但不限于CA72‑4基因在扩增、复制、转录、剪接、加工、翻译、修饰过程中所产生的分子，例如前体蛋白、成熟的蛋白、天然存在的变体、修饰的蛋白、或其片段。[0012] “确定CA72‑4水平”是指确定样本中CA72‑4存在的量，尤其是蛋白质水平的量。[0013] 本申请中“第一”、“第二”等序数词，仅用于区分不同的产品、步骤、特征、活性成分，不代表特定的顺序、等级或程度。[0014] 在一些具体的实施方案中，第一试剂包含以下或由以下组成：[0015] 甘氨酸缓冲液0.01M至0.2M(例如0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.20M、或任意两个数值间的范围)；[0016] 分散剂0.05M至1M(例如0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0M、或任意两个数值间的范围)；[0017] 促聚剂0.1％w/v至2％w/v(例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0％、或任意两个数值间的范围)；[0018] 阻断剂10mg/L至200mg/L(例如10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200mg/L、或任意两个数值间的范围，可以是小数或整数)；[0019] 表面活性剂0.05％w/v至1.0％w/v(例如0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0％、或任意两个数值间的范围)；[0020] 防腐剂0.05％w/v至2％w/v(例如0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0％、或任意两个数值间的范围)；[0021] pH5至8(例如5、6、7、8、或任意两个数值间的范围，可以是小数或整数)。[0022] 在一些具体的实施方案中，第二试剂包含以下或由以下组成：[0023] Hepes缓冲液0.01M至0.2M(例如0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.20M、或任意两个数值间的范围)；[0024] CA72‑4抗体包0.1％w/v至0.3％w/v(例如0.1、0.2、0.3％、[0025] 被的胶乳微球或任意两个数值间的范围)；[0026] 蔗糖1％w/v至10％w/v(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10％、或任意两个数值间的范围，可以是小数或整数)；[0027] 酪蛋白0.2％w/v至5％w/v(例如0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0％、或任意两个数值间的范围)；[0028] 防腐剂0.05％w/v至0.5％w/v(例如0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5％、或任意两个数值间的范围)；[0029] pH7至8(例如，两个数值间的范围，可以是小数或整数)，优选7.5。[0030] 在一些具体的实施方案中，分散剂选自以下任一项或组合：氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁、氯化钙。[0031] 在一些实施方案中，促聚剂选自以下任一项或组合：聚乙烯吡咯烷酮、PEG12000、PEG8000、PEG6000。[0032] 在一些具体的实施方案中，所述促聚剂是PVP360000。[0033] 在一些具体的实施方案中，聚乙烯吡咯烷酮是0.05％、0.10％、0.20％、0.40％、1.0％、1.5％、2.0％(w/v)。[0034] 在一些实施方案中，阻断剂选自以下任一项或组合：HBR‑5、HBR‑6、HBR‑7、HBR‑21、HBR‑22、HBR‑23、HBR‑24、HBR‑28、HIER‑R‑001、HIER‑E‑010D、CBS10‑KC。[0035] 在一些具体的实施方案中，所述阻断剂是HIER‑E‑010D。[0036] 在一些实施方案中，表面活性剂不是：TW20、TW80、NP40、Thesit、Brij23。[0037] 在一些具体的实施方案中，所述表面活性剂是二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚。[0038] 在一些具体的实施方案中，防腐剂选自以下任一项或组合：叠氮钠、叠氮钠、PC300、山梨酸、苯甲酸。[0039] 术语“抗体”以最广义的范围使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体、和抗体片段，只要它们展现出期望的抗原结合活性。[0040] 抗体(免疫球蛋白)是由两条重链和两条轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白的重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，故其抗原性也不同。据此，可将免疫球蛋白分为：IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。[0041] 术语“抗原结合片段”是指抗体的片段及抗体类似物，其通常包括至少部分母体抗体的抗原结合区或可变区(例如一个或多个CDR)。抗体片段保留了母体抗体的结合特异性。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab’、Fab’‑SH、F(ab′)2、Fd、dAb、纳米抗体、VHH结构域、线性抗体、单链抗体分子(scFv)。[0042] CA72‑4抗体能够识别并结合CA72‑4或其表位。[0043] CA72‑4抗体源自以下的一种或组合：鼠、兔、羊、禽、骆驼、重组表达。[0044] 术语“表位”是指CA72‑4抗原上与免疫球蛋白(或抗体)结合的位点。表位可以由相邻的氨基酸形成、或由不相邻的氨基酸通过蛋白质的三级折叠而形成。表位通常以独特的空间构象包括至少3‑15个氨基酸。确定抗体结合什么表位的方法在本领域中是熟知的，包括免疫印迹和免疫沉淀检测分析等。确定表位的空间构象的方法包括本领域中的技术和本文所述的技术，例如X射线晶体分析法和二维核磁共振等。[0045] 在一些具体的实施方案中，第一试剂不包含BSA。[0046] 在一些具体的实施方案中，第二试剂不包含BSA。[0047] 本申请出乎意料地发现，BSA会与检测体系发生非特异性结合，从而对检测结果造成干扰。[0048] 在一些具体的实施方案中，胶乳微球是聚苯乙烯胶乳微球。[0049] 在一些具体的实施方案中，胶乳微球的表面修饰有选自以下的任一基团或组合：羧基、氨基、巯基、羟基。[0050] 在一些具体的实施方案中，CA72‑4抗体共价或非共价结合至胶乳微球的表面。[0051] 在一些具体的实施方案中，胶乳微球的平均粒径是100nm至350nm(例如，100、150、200、250、300、350、或前述任意两个数值间的范围，可以是小数或整数)。[0052] 应当理解，试剂中的胶乳微球是众多单个微球的混合物。例如，当提及100nm的粒径时，不是指每个独立微球的粒径均是100nm整，而是指所用胶乳微球的粒径规格或型号，其中微球的粒径范围分布在100nm附近。[0053] 在一些实施方案中，本申请的试剂还包含校准品和/或质控品。[0054] 校准品主要用于校准测量系统、评价测量程序或为待测样本赋值。因此，所述校准品包含已知浓度的CA72‑4，校准品的值可以追溯到本领域公知的或商售的标准品。[0055] 本领域技术人员可以采用本领域常用的方法，自行制备适当浓度的校准品，也可以使用市售校准品、或制造商提供的产品校准品等。[0056] 在一些实施方案中，校准品包含已知浓度的CA72‑4，如0.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0U/mL。[0057] 质控品是指将已知量的待测样品加入到生物介质中配制而成，用于质量控制。本领域技术人员可以采用本领域常用的方法，自行制备适当浓度的质控品，也可以使用市售质控品等。[0058] 在一些实施方案中，质控品包含已知浓度的CA72‑4，如8.0U/mL、30U/mL。[0059] 在一些实施方案中，提供了一种检测样本中CA72‑4水平的方法，包括：[0060] ‑提供样本，[0061] ‑使样本和本申请的试剂接触，[0062] ‑确定样本中CA72‑4的水平。[0063] 胶乳免疫比浊检测技术是在胶乳凝集定性试验基础上发展建立的一种均相免疫测定法，可以对各种微量的抗原物质和小分子半抗原进行精确的定量测定。原理是根据特异性抗体包被致敏的胶乳微粒，与待测标本中的相应CA72‑4抗原相遇时发生凝集反应出现浊度，通过吸光度检测比较浊度程度与被测物的浓度呈函数关系，通过生成的剂量‑反应曲线可测出标本中待测CA72‑4抗原的含量。附图说明[0064] 图1：本公开CA72‑4胶乳免疫比浊试剂盒的定标曲线。[0065] 图2：本公开CA72‑4胶乳免疫比浊试剂盒的线性结果。[0066] 图3：阻断剂对样本测值的影响。[0067] 图4：0.2％TW80表面活性剂对试剂稳定性的影响。[0068] 图5：0.3％TW80表面活性剂对试剂稳定性的影响。[0069] 图6：0.3％TW20表面活性剂对试剂稳定性的影响。[0070] 图7：0.3％NP40表面活性剂对试剂稳定性的影响。[0071] 图8：0.3％Thesit表面活性剂对试剂稳定性的影响。[0072] 图9：0.3％Brij23表面活性剂对试剂稳定性的影响。[0073] 图10：0.3％EmulgenA90对试剂稳定性的影响。[0074] 图11：加速后定标吸光度变化。具体实施方式[0075] 实施例1.本申请的试剂盒的制备[0076] 1.第一试剂的制备：[0077] 第一试剂包含：[0078][0079] 室温条件下，按照上述进行第一试剂的配制。[0080] 2.第二试剂配制过程如下[0081] 将0.5ml粒径规格200nm的聚苯乙烯胶乳溶液(浓度10％)加入4.5ml0.05MMES(PH6.0)和150μlEDC(碳化二亚胺，浓度5mg/mL)，于37℃静置1小时；[0082] 单克隆抗体用5ml0.05MTris缓冲液(PH7.5)稀释后立即加入到上述缓冲液中，在37℃反应2小时；[0083] 加入1ml0.1M甘氨酸缓冲液(PH7.0)搅拌1小时终止反应；[0084] 用20ml100mM的甘氨酸缓冲液(PH7.0)洗涤，离心去上清，洗涤3次；[0085] 用保存缓冲液重悬胶乳微球，使之分散成白色胶乳悬浮液；[0086] 第二试剂中CA72‑4单克隆抗体包被的聚苯乙烯胶乳微球浓度为0.20％；抗体在第二试剂中的浓度相当于0.065g/L。[0087] 保存缓冲液的组成：[0088][0089] 第二试剂中的单克隆抗体为两种不同的单克隆抗体(靶向不同表位即可，可选择能够避免位阻的抗体以免互相影响和抗原的结合)。在一个实例中，两种单抗的质量比(或物质的量比)是1:1。[0090] 优化例1.试剂准确性和稳定性的优化[0091] 1.阻断剂的影响[0092] 按照实施例1的方法制备试剂盒，区别在于替换不同种类的阻断剂，观察血清样本测值的影响。不同种类的阻断剂如下：[0093][0094] 从图3可以看出，使用阻断剂3和阻断剂6后，2例异常高值血清恢复正常(这两个阻断剂均为HIER‑E‑010D，区别为批号不同)。该阻断剂明显改善了试剂的测值准确性，但加入后试剂的稳定性减弱。[0095] 在随后的测试中(参见优化例1下述的第3点)，申请人出乎意料地发现，该阻断剂和表面活性剂(二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚)同时使用，相较于不含表面活性剂时，不仅能保证该试剂盒测值准确性，试剂的稳定性也明显改善。[0096] 2.表面活性剂的影响[0097] 按照实施例1的方法制备试剂盒，区别在于替换不同种类的和不同浓度的表面活性剂。[0098] (1)从图4和表1可以看出，若使用TW80表面活性剂，试剂加速后定标吸光度虽然比较稳定，但样本测值平均降低10％，影响试剂的临床使用(4℃对照，图中也作4℃试剂)。[0099] 表1.0.2％TW80表面活性剂对试剂加速后测值的影响[0100]样本 4℃对照 37℃‑7天 偏差1 12.3 9.5 ‑22.8％2 26.7 24.6 ‑7.9％3 45.9 41.3 ‑10.0％4 38.9 34.9 ‑10.3％5 14.9 13.9 ‑6.7％6 28.5 26.3 ‑7.7％[0101] (2)从图5和表2可以看出，使用0.3％TW80表面活性剂，试剂加速后，定标吸光度变化不大，但样本测值平均降低20％。[0102] 表2.0.3％TW80表面活性剂对试剂加速后测值的影响[0103]样本 4℃对照 37℃‑7天 偏差1 8.6 6.9 ‑19.8％2 11.2 8.8 ‑21.4％3 10.6 8.6 ‑18.9％4 16.3 13.1 ‑19.6％5 30.7 27.4 ‑10.7％6 34.8 28.6 ‑17.8％7 166.1 151.5 ‑8.8％[0104] 综上，可以看出，随着TW80用量增大，定标吸光度均比较稳定，但样本测值降低幅度增大。[0105] (3)使用TW20表面活性剂，试剂加速稳定性特别差，吸光度和样本测值都会发生明显变化(图6和表3)。[0106] 表3.0.3％TW20表面活性剂对试剂加速后测值的影响[0107] 样本 4℃对照 37℃‑7天 偏差1 6.9 4.6 ‑33％2 7.9 3.5 ‑56％3 47.1 42.1 ‑11％4 54.5 55.3 1％5 97.6 84.9 ‑13％6 56.6 53.8 ‑5％7 78.6 72.8 ‑7％[0108] (4)使用NP40表面活性剂，稳定性可以接受，但欧盟法规不允许使用NP40(图7)。[0109] 表4.0.3％NP40表面活性剂对试剂加速后测值的影响[0110]样本 4℃对照 37℃‑7天 偏差1 5.0 5.3 6％2 8.6 8.4 ‑2％3 53.1 51.9 ‑2％4 79.0 75.3 ‑5％5 110.0 106.3 ‑3％6 71.2 67.5 ‑5％7 88.8 85.1 ‑4％[0111] (5)使用Thesit表面活性剂，试剂加速后样本的吸光度下降幅度较大，不稳定(图8)。[0112] 表5.0.3％Thesit表面活性剂对试剂加速后测值的影响[0113]样本 4℃对照 37℃‑7天 偏差1 5.7 5.5 ‑4％2 8.1 8.3 2.0％3 52.7 52.2 ‑1％4 70.2 71.7 2％5 76.7 76.7 0％6 67.6 67.5 0％7 86.9 86.8 0％[0114] (6)使用Brij23表面活性剂，试剂加速后吸光度变化幅度较大，不稳定(图9)。[0115] 表6.0.3％Brij23表面活性剂对试剂加速后测值的影响[0116]样本 4℃对照 37℃‑7天 偏差1 5.1 5.3 4％2 8.1 7.7 ‑5％3 52.1 52.2 0％4 12.1 12.4 2％5 118.5 120.9 2％6 57.0 56.5 ‑1％7 130.1 131.5 1％[0117] 根据表5和表6，在试剂被加速前后，含Thesit和Brij23时样本的测值变化虽然不大，但这两组在加速后的定标吸光度不稳定。因此，需要经常进行定标，甚至不能保证重复定标后样本测值的准确性。需要定标和加速前后的样本测值均比较稳定的试剂，才能保证试剂的性能。[0118] 3.阻断剂和表面活性剂的联用[0119] 只有当使用二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚作为表面活性剂时，试剂加速后吸光度和样本测值才比较稳定。[0120] 综上可以看出，阻断剂HIER‑E‑010D和二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚(EmulgenA90)组合使用可以优化CA72‑4胶乳免疫比浊检测试剂盒的准确性和稳定性(表7和图10)。[0121] 表7.0.3％二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚对试剂加速后测值的影响[0122][0123][0124] 优化例2.重复性的优化过程[0125] 按照实施例1的方法制备试剂盒，区别在于：不同种类的促聚剂。发现第一试剂中使用PVP360000，能明显改善测值重复性。[0126] 表8.使用不同促聚剂对重复性的影响[0127][0128][0129] 测试例1.本申请试剂盒的线性范围[0130] 按照实施例1的方法制备试剂盒，测试200U/mL的高值血清，用纯化水按照等差稀释方法检测该试剂盒的线性，结果如下。[0131] 表9.试剂盒线性[0132]稀释比例 测值1 测值2 均值 理论值 绝对偏差 相对偏差0 0.0 0.0 0.00 0.42 ‑0.42 ‑100.0％0.0125 2.4 2.5 2.46 2.93 ‑0.47 ‑15.9％0.025 5.0 5.1 5.03 5.44 ‑0.41 ‑7.6％0.05 10.0 10.1 10.04 10.46 ‑0.42 ‑4.0％0.1 20.4 20.4 20.36 20.51 ‑0.15 ‑0.7％0.2 39.9 39.8 39.83 40.61 ‑0.78 ‑1.9％0.3 62.8 62.7 62.76 60.70 2.06 3.4％0.4 79.7 78.6 79.16 80.80 ‑1.64 ‑2.0％0.5 105.2 104.5 104.88 100.89 3.99 4.0％0.6 119.6 119.1 119.36 120.99 ‑1.63 ‑1.3％0.7 143.5 144.5 144.03 141.08 2.95 2.1％0.8 158.9 159.4 159.16 161.18 ‑2.02 ‑1.3％0.9 182.2 183.4 182.81 181.27 1.54 0.8％1 199.3 198.2 198.76 201.37 ‑2.60 ‑1.3％[0133] 表9可以看出，试剂盒能达到200U/mL的线性检测范围，而临床上常规样本CA72‑4的浓度大都集中在200U/mL以下，满足临床应用(图2)。[0134] 测试例2.重复性[0135] 按照实施例1的方法制备试剂盒，测试3例不同浓度的样本，各连续检测10次，计算检测的重复性(以精密度表示)；[0136] 表10.精密度的检测[0137] 序号 样本1 样本2 样本31 2.7 5.4 14.82 2.6 5.3 15.13 2.6 5.2 15.34 2.6 5.1 14.95 2.6 5.2 15.36 2.4 5.2 15.27 2.6 5.5 15.18 2.5 5.3 15.09 2.4 5.4 15.210 2.6 5.1 15.7均值 2.55 5.26 15.16方差 0.10 0.13 0.25CV 3.9％ 2.5％ 1.65％[0138] 表10可以看出，该试剂盒有良好的检测重复性，CA72‑4的参考范围是10U/mL，该试剂盒在参考范围内的重复性良好，满足临床应用。[0139] 测试例3.试剂稳定性[0140] 按照实施例1的方法制备试剂盒，取部分试剂放入37℃温箱加速7天，然后取出，与4℃对照同时上机定标，检测样本，观察试剂的加速稳定性。[0141] 表11.加速后样本测值变化[0142] 样本 4℃对照 37℃7天 变化样本1 4.2 4.4 5％样本2 7.8 7.5 ‑4％样本3 47.5 48.7 3％样本4 61.5 63.2 3％样本5 95.5 97.9 3％样本6 60.1 60.8 1％样本7 79.6 80.4 1％[0143] 从图11和表11数据可以看出，试剂加速7天后定标和样本测值变化率控制在5％以内，试剂比较稳定，满足临床使用。

专利地区：北京

专利申请日期：2021-12-24

专利公开日期：2024-06-18

专利公告号：CN114324855B