一种双羟萘酸多肽药物的制备方法发明专利

专利名称：一种双羟萘酸多肽药物的制备方法

专利类型：发明专利

专利申请号：CN202010999282.6

专利申请（专利权）人：深圳市星银医药有限公司
权利人地址：广东省深圳市罗湖区人民南路国际贸易中心大厦B11

专利发明（设计）人：申彦军,刘铠豪,谷冠宇

专利摘要：本发明涉及一种双羟萘酸盐药物的制备方法，解决了传统的多肽转双羟萘酸盐方法的杂质含量高、收率低的问题。所述方法主要为在以反相聚合物填料为固定相的色谱柱中，将双羟萘酸无机盐水溶液与有机溶剂按一定比例上样后再与多肽药物进行离子交换，完成转盐，通过洗脱程序以及后处理的控制，使得收率提高、离子和溶剂残留降低。本发明具有收率高、产品质量高、操作简便、工艺可控性强等优点。

主权利要求：
1.一种双羟萘酸多肽药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：以反相聚合物填料为固定相的制备色谱中，在一定的流速、一定的柱温条件下，流动相平衡色谱柱后，将多肽药物溶液上样至色谱柱；
步骤2：在有机相比例为25%‑65%的流动相条件下，将双羟萘酸无机盐水溶液与有机溶剂按一定比例上样至色谱柱，使得双羟萘酸无机盐与多肽药物进行离子交换，其中有机溶剂的比例为25%‑65%；
步骤3：离子交换完成后，用流动相进行梯度洗脱，收集目标峰，得到多肽药物的双羟萘酸盐溶液；
步骤4：浓缩多肽的双羟萘酸盐溶液，冷冻干燥，得到双羟萘酸盐型的多肽药物固体；
所述多肽药物选自亮丙瑞林、曲普瑞林、艾塞那肽、替度鲁肽、特利加压素、阿托西班、卡泊芬净中的一种；
所述色谱柱的直径为20mm‑300mm；
所述步骤2中双羟萘酸无机盐水溶液为钠盐或钾盐溶液，盐溶液浓度为20mM‑200mM；
所述流动相中的无机相A为水，有机相B选自甲醇、乙腈、乙醇中的一种或多种；
所述柱温由多肽类药物稳定性、对杂质的分离效果以及填料耐温范围具体而定；
所述反相聚合物填料为聚苯乙烯‑二乙烯基苯、聚苯乙烯‑聚甲基丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯中的一种；
所述步骤2中有机溶剂与流动相B相同；
所述步骤3中梯度洗脱第一时间段的流动相与步骤2中流动相一致，具体梯度洗脱程序如下，其中，A和B为体积百分比：时间（min） A（%） B（%）
0‑t1；t1范围：15≤t1≤30 A1；A1范围：35≤A1≤75 B1；B1范围：25≤B1≤65t1‑t2；t2范围：t2= t1+60 A1→A2；A2范围：0≤A2≤65，且A2< A1 B1→B2；B2范围： 35≤B2≤100，且B1
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中的流速为30mL/min‑
1600mL/min。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中双羟萘酸无机盐水溶液浓度为50mM‑70mM。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中离子交换所需流动相的体积为2‑5倍柱体积。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中离子交换所需流动相的体积为3‑4倍柱体积。 说明书 : 一种双羟萘酸多肽药物的制备方法技术领域[0001] 本发明属于多肽药物制备技术领域，特别涉及一种多肽转双羟萘酸盐的制备方法。背景技术[0002] 双羟萘酸，化学名为：4，4'‑亚甲基‑双(3‑羟基‑2‑萘酸)，其分子量为388，pka1为2.51和pka2为3.1，结构式为：[0003][0004] 该化合物是一种可生成盐类的物质，常用于药物制剂中制备药物的难溶型盐，难溶型盐在体内滞留时间长，可使药物缓慢释放，以达到长效作用的目的。多肽药物具有稳定性较差，在体内容易被降解，半衰期短，需连续给药等缺点。因此，将多肽制备成双羟萘酸盐型，可有效延长其在体内半衰期，减少给药次数。[0005] 现有技术CN105796501A公开了一种双羟萘酸亮丙瑞林缓释制剂的制备方法，转盐步骤如下：将醋酸亮丙瑞林和双羟萘酸盐分别用超纯水溶解后过滤，加入反应釜中，于‑10℃‑0℃，pH6.5‑7.5条件下反应1‑2h，过滤沉淀，洗涤，干燥后得到醋酸亮丙瑞林双羟萘酸盐。[0006] CN102504018A公开了一种蜂毒肽转帕莫酸盐的方法(帕莫酸也称双羟萘酸)，转盐步骤如下：将蜂毒肽溶于注射用水中，搅拌下加入帕莫酸钠盐溶液，结晶，将结晶沉淀过滤分离，用注射用水洗涤，干燥，得到蜂毒肽帕莫酸盐。[0007] 现有技术采用了溶解、反应、结晶、干燥的方式得到多肽的双羟萘酸盐型，该方法具有一定的可行性，工艺相对简单且成本小。但是，此类方法的反应过程常涉及调节pH和控制温度等操作，对pH和温度敏感的多肽，如含有Cys、Gln、Asn、Met等易被氧化、水解的氨基酸的多肽，产品的收率、离子和溶剂残留、样品的稳定性难以得到保证。此外，结晶过程的包裹现象也会导致离子和溶剂残留高。[0008] 目前，除了传统的结晶干燥法外，多肽类药物转盐的常用方法还有色谱法，主要通过离子交换完成转盐，与结晶干燥法相比，具有能较好的控制有机溶剂、离子残留等杂质的优势。但是多肽的双羟萘酸盐样品的溶解度较小，利用色谱法转双羟萘酸盐时，样品不能完全洗脱出来，导致收率低、有机溶残超标等问题。因此，目前没有利用色谱法转双羟萘酸盐的报道。发明内容[0009] 为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种双羟萘酸盐药物的制备方法，技术方案如下：[0010] 一种双羟萘酸多肽药物的制备方法，包括以下步骤：[0011] 步骤1：以反相聚合物填料为固定相的制备色谱中，在一定的流速、一定的柱温度条件下，流动相平衡色谱柱后，将多肽药物溶液上样至色谱柱；[0012] 步骤2：在一定比例的流动相条件下，将双羟萘酸无机盐水溶液与有机溶剂按一定比例上样至色谱柱，使得双羟萘酸无机盐与多肽药物进行离子交换；[0013] 步骤3：离子交换完成后，用流动相进行梯度洗脱，收集目标峰，得到多肽药物的双羟萘酸盐溶液；[0014] 步骤4：浓缩多肽的双羟萘酸盐溶液，冷冻干燥，得到双羟萘酸盐型的多肽药物固体。[0015] 所述流动相中的无机相A为水，有机相B选自甲醇、乙腈、乙醇中的一种或多种。[0016] 所述柱温由多肽类药物稳定性、对杂质的分离效果以及填料耐温范围具体而定。[0017] 所述步骤3中梯度洗脱第一时间段的流动相与步骤2中流动相一致。[0018] 在上述实施方案中，所述药物为氨基酸个数为3‑50的多肽类药物。[0019] 具体地，多肽类药物选自亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、西曲瑞克、地加瑞克、阿巴瑞克、依替巴肽、艾替班特、卡培立肽、胸腺法新、胸腺五肽、氨莫司汀、鲑鱼降钙素、依降钙素、特立帕肽、艾塞那肽、替度鲁肽、利拉鲁肽、索玛鲁肽、普兰林肽、那法瑞林、加尼瑞克、奥曲肽、生长抑素、特利加压素、比伐卢定、阿托西班、卡贝缩宫素、阿肽地尔、去氨加压素、卡泊芬净、齐考诺肽、兰瑞肽、他替瑞林。[0020] 优选地，所述步骤1中反相聚合物填料为聚苯乙烯‑二乙烯基苯、聚苯乙烯‑聚甲基丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯中的一种。[0021] 优选地，所述步骤1中色谱柱的直径为20mm‑300mm。[0022] 优选地，所述步骤1中流动相的流速为30mL/min‑1600mL/min。[0023] 优选地，所述步骤2中一定比例的流动相中有机相的比例为25％‑65％。[0024] 优选地，所述步骤2中双羟萘酸无机盐水溶液为钠盐或钾盐溶液，浓度为20mM‑200mM，更为优选的，浓度为50mM‑70mM。[0025] 优选地，所述步骤2中有机溶剂选自乙腈、乙醇、甲醇中的一种或多种，有机溶剂比例为25％‑65％。[0026] 优选地，所述步骤2中双羟萘酸无机盐与多肽药物进行离子交换所需流动相的体积为2‑5倍柱体积，更为优选的，为3‑4倍柱体积。[0027] 优选地，所述步骤3中检测波长为230nm，具体梯度洗脱程序如下，其中，A和B为体积百分比，[0028][0029] 为更清晰的了解本发明的技术特点及解决的问题，补充对比表格如下：[0030][0031] 药物在转双羟萘酸盐型时，由于其溶解度较小，利用色谱法分离时，样品不能完全洗脱，必然会导致收率的极大降低、有机溶剂等残留量大的问题，本领域技术人员不会考虑采用色谱法进行药物的双羟萘酸盐制备。本发明创造性地利用色谱法进行药物的双羟萘酸盐制备，在以反相聚合物填料为固定相的制备色谱中，将双羟萘酸的无机盐水溶液与有机溶剂按一定比例上样后再与多肽药物进行离子交换，完成转盐，通过洗脱程序以及后处理的控制，出乎意料地，通过一步色谱法就可以完成纯化和转盐，且收率得到提高，离子残留和有机溶剂残留降低，克服了现有的技术偏见。与现有技术相比，本发明具有收率高、离子残留量低、有机溶剂残留量较低，产品质量高、操作简便、工艺可控性强等优点。附图说明[0032] 图1为双羟萘酸曲普瑞林的液相色谱图；[0033] 图2为双羟萘酸特利加压素的液相色谱图；[0034] 图3为双羟萘酸亮丙瑞林的液相色谱图；具体实施方式[0035] 下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明。实施例不应限定为对保护范围的限制。[0036] 实施例1[0037] 转盐条件：制备色谱柱：填料为聚苯乙烯‑二乙烯基苯的UniPS40‑300。柱直径为30mm，柱温25℃，流速30mL/min，检测波长230nm，流动相：A相：水，B相：乙醇，梯度洗脱程序见表1：[0038] 表1实施例1的梯度洗脱程序[0039][0040] 转盐过程：[0041] a.5％乙醇水溶液平衡色谱柱10min，将阿托西班粗品溶液以30mL/min的流速上样至色谱柱；[0042] b.在25％乙醇流动相条件下，200mM的双羟萘酸二钠盐水溶液与乙醇按75:25的比例过柱，与阿托西班粗品溶液进行离子交换，交换时间为3倍柱体积；[0043] c.线性梯度洗脱75min，收集目标峰进行浓缩、冷冻干燥。[0044] 收率98％，纯度98.38％，测得钠离子含量0.05％，三氟乙酸根未检出，乙醇含量0.05％。[0045] 实施例2[0046] 转盐条件：色谱柱：填料为聚苯乙烯‑二乙烯基苯的UniPS40‑300，柱直径为30mm。柱温25℃，流速30mL/min，检测波长230nm，流动相：A相：水，B相：乙醇，梯度洗脱程序见表2：[0047] 表2实施例2的梯度洗脱程序[0048][0049] 转盐过程：[0050] a.5％乙醇水溶液平衡色谱柱10min，将曲普瑞林溶液以30mL/min的流速上样至色谱柱；[0051] b.在25％乙醇流动相条件下，50mM的双羟萘酸二钠盐水溶液与乙醇按75:25的比例过柱，与曲普瑞林溶液进行离子交换，过柱交换体积为3倍柱体积；[0052] c.梯度洗脱75min，收集目标峰进行浓缩、冷冻干燥。[0053] 收率98％，检测纯度98.82％(见图1)，测得钠离子含量0.06％，乙醇含量0.04％；[0054] 实施例3[0055] 转盐条件：色谱柱：填料为聚苯乙烯‑聚甲基丙烯酸酯的UniPSN40‑300，柱直径为150mm。柱温25℃，流速400mL/min，检测波长230nm，流动相：A相：水，B相：乙腈，梯度洗脱程序见表3：[0056] 表3实施例3的梯度洗脱程序[0057][0058] 转盐过程：[0059] a.5％乙腈水溶液平衡色谱柱10min，将曲普瑞林溶液以400mL/min的流速上样至色谱柱；[0060] b.在26％乙腈流动相条件下，30mM的双羟萘酸二钠盐水溶液与乙腈按75:25的比例过柱，与曲普瑞林溶液进行离子交换，过柱交换体积为4倍柱体积；[0061] c.梯度洗脱75min，收集目标峰进行浓缩、冷冻干燥。[0062] 收率99％，测得钠离子含量0.06％，乙腈含量0.03％；[0063] 实施例4[0064] 转盐条件：色谱柱：填料为聚甲基丙烯酸脂的UniPMM40‑500，柱直径为300mm。柱温25℃，流速1600mL/min，检测波长230nm，流动相：A相：水，B相：乙醇，梯度洗脱程序见表4：[0065] 表4实施例4的梯度洗脱程序[0066][0067] 转盐过程：[0068] a.5％乙醇水溶液平衡色谱柱10min，将曲普瑞林溶液以1600mL/min的流速上样至色谱柱；[0069] b.在25％乙醇流动相条件下，70mM的双羟萘酸二钠盐水溶液与乙醇按75:25的比例过柱，与曲普瑞林溶液进行离子交换，过柱交换体积为5倍柱体积；[0070] c.梯度洗脱80min，收集目标峰进行浓缩、冷冻干燥。[0071] 收率98％，测得钠离子含量0.07％，乙醇含量0.06％；[0072] 实施例5[0073] 转盐条件：色谱柱：填料为聚苯乙烯‑二乙烯基苯的UniPS40‑1000，柱直径为30mm。柱温25℃，流速30mL/min，检测波长230nm，流动相：A相：水，B相：乙腈，梯度洗脱程序见表5：[0074] 表5实施例5的梯度洗脱程序[0075][0076][0077] 转盐过程：[0078] a.5％乙腈水溶液平衡色谱柱10min，将曲普瑞林溶液以30mL/min的流速上样至色谱柱；[0079] b.在27％乙腈流动相条件下，50mM的双羟萘酸二钾盐水溶液与乙腈按70:30的比例过柱，与曲普瑞林溶液进行离子交换，过柱交换体积为2倍柱体积；[0080] c.梯度洗脱90min，收集目标峰进行浓缩、冷冻干燥。[0081] 收率98％，测得钾离子含量0.06％，乙腈含量0.03％；[0082] 实施例6[0083] 转盐条件：色谱柱：填料为聚苯乙烯‑二乙烯基苯的UniPSA30‑300，柱直径为30mm。柱温25℃，流速30mL/min，检测波长230nm，流动相：A相：水，B相：乙醇，梯度洗脱程序见表6：[0084] 表6实施例6的梯度洗脱程序[0085][0086] 转盐过程：[0087] a.5％乙醇水溶液平衡色谱柱10min，将特利加压素溶液以30mL/min的流速上样至色谱柱；[0088] b.在25％乙醇流动相条件下，50mM的双羟萘酸二钠盐水溶液与乙醇按75:25的比例过柱，与特利加压素溶液进行离子交换，过柱交换体积为3倍柱体积；[0089] c.线性梯度洗脱75min，收集目标峰进行浓缩、冷冻干燥。[0090] 收率97％，纯度98.44％(见图2)，测得钠离子含量0.06％，乙醇含量0.03％；[0091] 实施例7[0092] 转盐条件：色谱柱：填料为聚苯乙烯‑二乙烯基苯的UniNM50‑300，柱直径为30mm。柱温25℃，流速30mL/min，检测波长230nm，流动相：A相：水，B相：乙醇，梯度洗脱程序见表7：[0093] 表7实施例7的梯度洗脱程序[0094][0095] 转盐过程：[0096] a.5％乙醇水溶液平衡色谱柱10min，将亮丙瑞林溶液以30mL/min的流速上样至色谱柱；[0097] b.在30％乙醇流动相条件下，50mM的双羟萘酸二钠盐水溶液与乙醇按70:30的比例过柱，与亮丙瑞林溶液进行离子交换，过柱交换体积为3倍柱体积；[0098] c.线性梯度洗脱75min，收集目标峰进行浓缩、冷冻干燥。[0099] 收率97％，纯度98.14％(见图3)，测得钠离子含量0.07％，乙醇含量0.06％。[0100] 实施例8[0101] 转盐条件：色谱柱：填料为聚苯乙烯‑二乙烯基苯的UniPS10‑300，柱直径为50mm。柱温5℃，流速80mL/min，检测波长230nm，流动相：A相：水，B相：乙醇，梯度洗脱程序见表8：[0102] 表8实施例8的梯度洗脱程序[0103][0104] 转盐过程：[0105] a.5％乙醇水溶液平衡色谱柱10min，将卡泊芬净溶液以80mL/min的流速上样至色谱柱；[0106] b.在25％乙醇流动相条件下，50mM的双羟萘酸二钠盐水溶液与乙醇按75:25的比例过柱，与卡泊芬净溶液进行离子交换，过柱交换体积为3倍柱体积；[0107] c.线性梯度洗脱75min，收集目标峰进行浓缩、冷冻干燥。[0108] 收率98％，测得钠离子含量0.07％，乙醇含量0.03％；[0109] 实施例9[0110] 转盐条件：色谱柱：填料为聚苯乙烯‑二乙烯基苯的UniPS40‑300，柱直径为100mm。柱温25℃，流速200mL/min，检测波长230nm，流动相：A相：水，B相：乙腈，梯度洗脱程序见表9：[0111] 表9实施例9的梯度洗脱程序[0112][0113] 转盐过程：[0114] a.5％乙腈水溶液平衡色谱柱10min，将替度鲁肽溶液以200mL/min的流速上样至色谱柱；[0115] b.在65％乙腈流动相条件下，200mM的双羟萘酸二钾盐水溶液与乙腈按35:65的比例过柱，与替度鲁肽溶液进行离子交换，过柱交换体积为3倍柱体积；[0116] c.线性梯度洗脱75min，收集目标峰进行浓缩、冷冻干燥。[0117] 收率98％，测得钾离子含量0.08％，乙腈含量0.03％；[0118] 实施例10[0119] 转盐条件：色谱柱：填料为聚苯乙烯‑二乙烯基苯的UniPS40‑300，柱直径为100mm。柱温38℃，流速200mL/min，检测波长230nm，流动相：A相：水，B相：甲醇，梯度洗脱程序见表10：[0120] 表10实施例10的梯度洗脱程序[0121][0122] 转盐过程：[0123] a.5％甲醇水溶液平衡色谱柱10min，将艾塞那肽溶液以200mL/min的流速上样至色谱柱；[0124] b.在40％甲醇流动相条件下，100mM的双羟萘酸二钠盐水溶液与甲醇按60:40的比例过柱，与艾赛那肽溶液进行离子交换，过柱交换体积为3倍柱体积；[0125] c.线性梯度洗脱75min，收集目标峰进行浓缩、冷冻干燥。[0126] 收率98％，测得钠离子含量0.08％，甲醇含量0.04％；[0127] 对比例1[0128] 以阿托西班：双羟萘酸为1:1的摩尔比，将碱性双羟萘酸钠盐溶液加入阿托西班粗品溶液中，搅拌至结晶析出。将沉淀滤出，用水洗涤并真空干燥，得阿托西班双羟萘酸盐。[0129] 收率83％，纯度90.39％，测得钠离子含量0.90％，三氟乙酸含量0.36％，异丙醚含量0.28％。(阿托西班粗品中含有合成过程中残留的三氟乙酸和异丙醚杂质)[0130] 对比例2[0131] 转盐过程：以阿托西班：双羟萘酸为1:1的摩尔比，将碱性双羟萘酸钠盐溶液加入阿托西班粗品溶液中，搅拌至结晶析出。将沉淀滤出，用水洗涤并真空干燥，得阿托西班双羟萘酸盐。[0132] 纯化条件：制备色谱柱：填料为聚苯乙烯‑二乙烯基苯的UniPS40‑300，柱直径为30mm，柱温25℃，流速30mL/min，检测波长230nm，流动相：A相：水，B相：乙醇，梯度洗脱程序见表11：[0133] 表11对比例2的梯度洗脱程序[0134][0135] 纯化过程：[0136] a.将上述转盐得到的将阿托西班双羟萘酸盐用25％乙醇溶解；[0137] b.25％乙醇水溶液平衡色谱柱10min，将阿托西班双羟萘酸盐的乙醇溶液以30mL/min的流速上样至色谱柱，进行梯度洗脱；[0138] c.线性梯度洗脱65min，收集目标峰进行浓缩、冷冻干燥。[0139] 总收率81％，纯度98.17％，测得钠离子含量0.50％，乙醇含量0.06％。

专利地区：广东

专利申请日期：2020-09-22

专利公开日期：2024-07-26

专利公告号：CN114249800B