狂犬病灭活疫苗(PV/BHK-21株)

科技成果来源：浙江科技成果库;
地区：浙江
成果名称:狂犬病灭活疫苗(PV/BHK-21株)
成果登记号:DJ11225Y53
知识产权:国内领先
完成单位
序号 单位名称 通讯地址
1 杭州佑本动物疫苗有限公司 浙江省杭州市钱塘区白杨街道1号大街266号
完成人
序号 姓名 工作单位 对成果的贡献
1 李少丽 杭州佑本动物疫苗有限公司 狂犬病毒的高密度培养；抗原乳化技术开发；新产品申请规划
2 康斌 杭州佑本动物疫苗有限公司 狂犬病毒抗原乳化技术开发
3 丁昂俊 杭州佑本动物疫苗有限公司 狂犬病毒灭活抗原配苗控制
4 邵攀峰 杭州佑本动物疫苗有限公司 狂犬病毒的高密度培养的高密度培养
5 郭海军 杭州佑本动物疫苗有限公司 狂犬病毒灭活、纯化技术开发
6 吴月琴 杭州佑本动物疫苗有限公司 狂犬病毒抗原乳化技术开发
7 朱国坡 杭州佑本动物疫苗有限公司 狂犬病毒的高密度培养
成果简介:
1、课题来源与背景课题来源：自主立项背景：狂犬病是一种致死性传染病，所有温血动物包括人类均可感染，感染后的结局为1%死亡。狂犬病的足迹遍布全球15多个国家和地区，据WHO数据显示，狂犬病每年可造成全球6万左右人类死亡，对人类及动物生命、社会资源及国家公共卫生体系构成严重威胁。2、研究目的与意义狂犬病疫苗生产用细胞培养技术，主要有转瓶培养、细胞工厂培养和生物反应器悬浮培养等。传统的细胞培养工艺如转瓶、细胞工厂等，存在细胞培养过程中外源蛋白污染及产品批次内与批次间不稳定等因素，目前，利用生物反应器实现细胞的大规模培养来生产狂犬病疫苗已成为最普遍的技术，较传统的狂犬病疫苗生产工艺有很大的提升，有效保证了产品批次的稳定性，其中利用生物反应器进行全悬浮细胞大规模培养制备抗原液，更是目前生产宠物狂犬病灭活疫苗最先进的工艺。另外，传统的狂犬病疫苗生产工艺（转瓶培养、细胞工厂等），在产能及异源蛋白去除方面参差不齐。且我国用于动物的狂犬病疫苗研究及推广技术，明显落后于人用狂犬病疫苗，在动物免疫上存在很多不规范问题。现代生物技术的发展，也在不断推动兽医生物制品制造工艺的新突破，渐渐地，人们也从重点关注疫苗的免疫效力转移到了对不良反应的关注，在这一过程中，“纯化”工艺在现代工业生产中具有极致的魅力。分离纯化工程技术，也成为了决定兽用物制品纯度、效力、质量安全水平的关键因素。该疫苗引用人狂犬病灭活疫苗生产技术-层析纯化，有效去除大分子物质，以及过滤难以去除的蛋白成分和小分子物质，实现病毒蛋白高度纯化，是市面上首个采用层析纯化技术的宠物精制狂犬病疫苗。3、主要论点与论据目前国内共有9种毒株的狂犬病灭活疫苗，16家企业拥有生产批准文号。除杭州佑本拥有的狂犬病灭活疫苗（PV/BHK21毒株），采用了纯悬浮培养的方式进行生产，其余的狂犬疫苗均采用转瓶或者微载体贴壁细胞进行规模化培养。转瓶贴壁培养，细胞只能在固相载体表面生长，产量小，且占地面积大，成本高，劳动生产率低，批间差异大。微载体贴壁培养，需要用到微载体，解决了产量、占地面积以及批间差异的问题，但微载体的生产成本依然居高不下，且逐级放大后细胞状态会逐渐变差，不是最理想的生产模式。佑本采用BHK21细胞，不使用微载体，采用纯悬浮培养狂犬病毒，细胞密度可达2x1^7个/ml，是微载体培养方式的1倍以上，单位培养体积的产毒量提高接近1倍，极大降低了生产成本，非常容易规模化放大，生产方式非常理想。也是国内首个采用纯悬浮培养技术生产狂犬疫苗的企业，开创了国内狂犬病灭活疫苗BHK21细胞全悬浮培养的先河，关键技术：（1）采用与自然环境下人类容易感染的狂犬病毒同源性高的PV/BHK21株（达92%）作为疫苗毒种，所产生的抗体针对性更强，免疫保护效率更高。（2） 将PV/BHK21种毒接种BHK21纯悬浮细胞，结合高效发酵罐专利技术，可最大程度实现BHK21细胞的高密度培养。（3）收获的病毒抗原，采用只降解病毒核酸但不破坏病毒免疫原性的β-丙内酯（1:4）灭活，并采用分子筛层析纯化技术，去除无效蛋白，只保留狂犬病毒抗原，确保了抗原的纯度，是疫苗免疫无副反应的核心。（4）对于纯化的狂犬抗原，采用佑本独有的狂犬病毒定量检测技术，实现灭活抗原的定量检测，从而实现定量添加配制疫苗，确保了疫苗批次间的稳定性。最终出厂的狂犬病毒灭活疫苗浓度≥3μg/ml，纯度≥4%，每头份疫苗中含有灭活的狂犬病病毒抗原≥2IU。（5）将纯化后的灭活狂犬病毒与灭菌的氢氧化铝胶和明胶按照如下方式配苗：每头份疫苗中含灭活抗原1ml，氢氧化铝胶2mg，明胶2mg，乳化均匀后定量分装。4、创见与创新（1） 将PV/BHK21种毒接种BHK21纯悬浮细胞，结合高效发酵罐专利技术，可最大程度实现BHK21细胞的高密度培养。。（2）收获的病毒抗原，采用只降解病毒核酸但不破坏病毒免疫原性的β-丙内酯（1:4）灭活，并采用分子筛层析纯化技术，去除无效蛋白，只保留狂犬病毒抗原，确保了抗原的纯度，是疫苗免疫无副反应的核心。（3）将纯化后的灭活狂犬病毒与灭菌的氢氧化铝胶和明胶按照如下方式配苗：每头份疫苗中含灭活抗原1ml，氢氧化铝胶2mg，明胶2mg，乳化均匀后定量分装。5、社会经济效益本品创新性引入人用疫苗的层析纯化技术，抗原纯度更高（4%），不良反应率更低。国内现有16家企业生产的9种狂犬疫苗均未实现全悬浮培养与层析纯化集成工艺，本品为国内首创，为生产企业带来了好的经济效益和社会效益。
评价（鉴定、验收）委员会名单
序号 姓名 单位 专业领域 职称
1 盛荣 浙江大学 药物化学 副高
2 张华 浙江省医药健康产业集团 制药工程 副高
3 方晨鹏 浙江省新材料产业协会 材料学 副高
4 钱超 浙江大学 化工 正高
5 陈勇 浙江工业大学 工业工程 正高
组织评价单位:浙江布锐芝新产品新技术鉴定中心
评价（鉴定、验收）意见:
浙江布锐芝新产品新技术鉴定中心于2025年9月15日在杭州组织召开了由杭州佑本动物疫苗有限公司研发的新产品“狂犬病灭活疫苗”鉴定会。鉴定委员会听取了技术工作总结、产品检测、科技查新和用户使用等报告，审查了相关资料，经讨论质询，形成如下鉴定意见：1、提供的资料基本齐全、规范，符合鉴定要求。2、项目产品采用PV/BHK21作为疫苗种毒，结合纯悬浮细胞培养工艺，实现细胞高密度培养与高效抗原量产；通过β-丙内酯靶向灭活与分子筛层析纯化工艺去除无效杂质，保障抗原纯度；创新应用狂犬病毒抗原定量检测技术，确保疫苗抗原含量稳定。产品在毒株筛选、规模化量产、高纯度提纯及定量检测方面有创新，相关技术获实用新型专利1件，处国内同类产品领先水平。3、产品经中国兽医药品监察所检测，所测指标符合相关标准技术。4、企业已通过ISO91：215质量管理体系认证，其生产设备、工艺工装和检测手段能满足批量生产要求。鉴定委员会认为，该产品的研发是成功的，同意通过鉴定。

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