一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉及其制备方法发明专利

一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉及其制备方法

本发明涉及复合蛋白粉技术领域，具体涉及一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉及其制备方法，其包括以下重量份数的原料：大豆分离蛋白10～30份、花生蛋白粉5～8份、牡蛎肽20～40份、聚葡萄糖5～10份、木糖醇2～5份和葡萄糖酸锌1～3份。本发明复合蛋白粉配方合理，具有较强抗过敏作用，制备的牡蛎肽无腥味和异味，风味可口，顾客极易接受，且牡蛎酶解液中蛋白质水解度和回收率明显增强，其蛋白质水解度可达到42％以上，回收率可达到90％以上。

专利类型：发明专利

专利申请号：CN112641103B

专利申请（专利权）人：广州天启生物科技有限公司
权利人地址：广东省广州市天河区海安路13号之一2804室(部位:之三号)

专利发明（设计）人：谢涛,王中振,谢骞,刘家生

主权利要求:一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及复合蛋白粉技术领域，尤其是涉及一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉及其制备方法。
背景技术
[0002] 免疫是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质，正常情况下，人体免疫系统会对异己抗原排异，抗感染，消除衰老，损伤的细胞；当免疫系统失调时，就会出现反应低下，有时甚至反应过激，引起变态反应，造成机体对自身的伤害等，这种变态反应就是过敏，主要由IgE介导，其临床症状主要有：腹泻、荨麻疹、发热、呕吐等，严重情况下还可能造成虚脱和休克，甚至危害生命，威胁着易过敏人群的身体健康，根据国外流行病学的调查资料显示：全球大约有6％的儿童和3％‑4％成年人会对一种或几种食物过敏，且发病率和死亡率呈逐渐上升趋势，因此，国内外都在致力开发过敏性或者具有抗过敏性的食品、保健食品和医疗用品。

[0003] 1999年国际食品法典委员会上，公布了八大类主要过敏食物，分别为鱼类、甲壳类、奶类、蛋类、花生、大豆、小麦、坚果类，并认为90％以上的食物过敏反应均是由以上八大类食物引起。常见食物过敏脱敏方法主要有加热、酶解、辐射等。热处理可以使过敏源的蛋白结构发生变化，使其空间抗原表位发生改变或者破坏，从而在一定程度上降低或祛除致敏性。史晓霞等研究发现不同温度热处理后的卵类蛋白二级蛋白结构的α‑螺旋，β‑折叠，β‑转角以及无规卷曲之间相互转化导致其过敏性变化，酶解会使蛋白质的肽链发生断裂，生成分子量更小的多肽或游离氨基酸，破坏过敏原表位原有的空间结构，从而降低其过敏性。王丽娟等利用木瓜蛋白酶水解凡纳滨对虾肉及虾蛋白，发生酶解产物致敏性明显降低，但未能完全消除。

[0004] 食源性低聚肽是以动植物食物蛋白为材料，经过酶解、分离纯化、喷雾干燥得到的低聚肽混合物，低聚肽的分子量大部分在1000u以下，远远小于蛋白质的分子量，主要以二肽或三肽为主，比游离的氨基酸更容易被人体吸收，具有促消化吸收，降胆固醇、抗氧化扥一系列的营养价值，近年来一些小分子量的低聚肽对透明质酸梅的活性具有一定抑制作用，从而起到抗过敏作用，可以改善过敏人群的饮食条件。有中国专利文献CN105614898A公开了一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉，其蛋白粉的氨基酸组成优于联合国粮农组织和世界卫生组织推荐的必需氨基酸生理量的估计值，但是该发明经过酶解后的牡蛎肽中的脂肪可能发生氧化反应，容易有较重的腥味和异味，将牡蛎肽添加至蛋白粉中，蛋白粉的风味变差，同时抗过敏的效果不佳，因此，还有改善的空间。
发明内容
[0005] 针对现有技术存在的不足，本发明的目的之一是提供一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉，配方合理，抑制透明质酸酶的活性效果好，具有较强抗过敏的作用，且制备的牡蛎肽无腥味和异味，香气浓郁，无不良气味，风味可口；本发明采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶复配，结合牡蛎酶解液pH值、酶解温度和酶解时间的调节，使得牡蛎酶解液中蛋白质水解度和回收率明显增强，其蛋白质水解度可达到42％以上，回收率可达到90％以上。
[0006] 本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：
[0007] 一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉，包括以下重量份数的原料：
[0008] 大豆分离蛋白10～30份、花生蛋白粉5～8份、牡蛎肽20～40份、聚葡萄糖5～10份、木糖醇2～5份和葡萄糖酸锌1～3份。
[0009] 优选地，包括以下重量份数的原料：大豆分离蛋白15～30份、花生蛋白粉6～8份、牡蛎肽25～40份、聚葡萄糖5～9份、木糖醇2～4份和葡萄糖酸锌1～2份。
[0010] 优选地，包括以下重量份数的原料：大豆分离蛋白25份、花生蛋白粉6份、牡蛎肽38份、聚葡萄糖6份、木糖醇4份和葡萄糖酸锌2份。
[0011] 优选地，所述牡蛎肽的制备方法包括：所述牡蛎肽以新鲜无壳牡蛎粉为原料，溶解于pH值6.5～7.5的乙酸‑乙酸钠缓冲溶液中，配成质量浓度为5～8％的牡蛎粉溶液，添加蔗糖脂肪酸酯；向牡蛎粉溶液添加碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶，在温度为50～60℃恒温水解2～3h，在酶解结束后加入0.3～0.9倍无壳牡蛎粉重量的普鲁兰多糖，形成牡蛎酶解液；然后将牡蛎酶解液加热至85～95℃进行灭酶，调节牡蛎肽酶解液pH值为5.5～6.0，冷却后于8000～9000r/min离心15～20min，取上清液用再生纤维素透析袋透析，再进行浓缩干燥得牡蛎肽。
[0012] 优选地，所述碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶的质量比为1:(2.5～4):(1.5～3)。

[0013] 优选地，所述牡蛎粉溶液与碱性蛋白酶的质量比为1:(0.1～0.3)。
[0014] 优选地，所述蔗糖脂肪酸酯的添加量为无壳牡蛎粉重量的0.3～0.9倍。
[0015] 优选地，所述蔗糖脂肪酸酯的HLB为6～9。
[0016] 优选地，再生纤维素透析袋的分子截留量为500～1000Da。
[0017] 本发明的目的之二是提供一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
[0018] S1.将上述重量份数的大豆分离蛋白、花生蛋白粉和牡蛎肽混合搅拌，得混合物A；
[0019] S2.将上述重量份数的聚葡萄糖、木糖醇和葡萄糖酸锌混合搅拌，加入体积分数为60～75％的乙醇混合，得混合物B；

[0020] S3.将混合物A加至混合物B中搅拌均匀，搅拌温度为80～90℃，搅拌速度1000～1500r/min，搅拌时间3～5min，去除乙醇后，将温度降低至常温，通过真空冷冻干燥得复合肽蛋白质粉，真空冷冻干燥时间为8～10h，温度为30～35℃，真空度为150～200Pa。

[0021] 蔗糖脂肪酸酯，是一种非离子型表面活性剂，含有亲水性和亲油性基团，乳化稳定性高，耐水解性强，能降低表面张力，蔗糖脂肪酸酯含有的亲水性基团可以破坏大分子分子间和分子内的氢键，以提高牡蛎粉的溶解性，在本发明的技术方案中，发明人意外在牡蛎粉酶解过程前添加HLB为6～9的蔗糖脂肪酸酯，发现制备的牡蛎肽腥味和异味大大减弱，风味较佳，进一步改善了复合蛋白粉的口感，本发明机理还在研究中，推测酶解过程中蔗糖脂肪酸酯可以减慢不饱和脂肪酸氧化，使得不容易释放牡蛎原有的海腥物质，阻止了蛋白质酶解产物中大量释放的氨基酸与其他脂肪氧化产物发生反应，以减少酸败的作用，减少牡蛎酶解液色、香、味的不断恶化。并且添加普鲁兰多糖后降低牡蛎肽的腥味和异味的效果达到最佳，牡蛎肽香气浓郁，无不良气味，风味可口，目前现有技术中还暂未公开蔗糖脂肪酸酯和普鲁兰多糖具备去腥的作用。
[0022] 本发明使用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶三种蛋白酶以特定的比例复配，结合牡蛎酶解液pH值、酶解温度和酶解时间的调节，使得牡蛎酶解液中蛋白质水解度和回收率明显增强，其蛋白质水解度可达到42％以上，回收率可达到90％以上。此外，本发明制备的牡蛎肽粉添加至复合蛋白粉中，较佳的抑制透明质酸酶的活性，起到较强抗过敏的作用。
[0023] 综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：
[0024] 1.本发明提供了一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉，在牡蛎粉酶解过程前添加HLB为6～9的蔗糖脂肪酸酯，制备的牡蛎肽无腥味和异味，香气浓郁，无不良气味，风味较佳，改善了复合蛋白粉的口感，同时本发明的复合蛋白粉提高了抑制透明质酸酶的活性，起到增强抗过敏的作用；
[0025] 2.本发明提供了一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉，碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶三种蛋白酶以特定的比例复配，结合牡蛎酶解液pH值、酶解温度和酶解时间的调节，使得牡蛎酶解液中蛋白质水解度和回收率明显增强，其蛋白质水解度可达到42％以上，回收率可达到90％以上；
[0026] 3.本发明提供了一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉的制备方法，制备方法简单，易于工业化生产。
具体实施方式
[0027] 以下对本发明作进一步详细说明。
[0028] 牡蛎肉为市售产品，营养成分含量(以鲜重％计)如下：蛋白质9.80±0.31，脂肪2.65±0.33，糖2.74±0.11，灰分1.69±0.06，水分79.12±0.95；本发明将新鲜牡蛎肉通过常规技术进行干燥，然后粉碎，制得新鲜无壳牡蛎粉。

[0029] 蔗糖脂肪酸酯(深圳乐芙生物科技有限公司)；普鲁兰多糖(上海源叶生物科技有限公司，CAS号为9057‑02‑7)；碱性蛋白酶(Alcalase2.4L，诺维信中国生物技术有限公司)、中性蛋白酶(上海前尘生物科技有限公司，货号为04942078001)和角蛋白酶(深圳乐芙生物科技有限公司)。
[0030] 实施例1
[0031] 本发明牡蛎肽粉的制备方法，包括以下步骤：
[0032] A.以新鲜无壳牡蛎粉为原料，分散于pH值6.5的乙酸‑乙酸钠缓冲溶液中，配成质量浓度为5％的牡蛎粉溶液，添加0.2倍无壳牡蛎粉重量的蔗糖脂肪酸酯，蔗糖脂肪酸酯的HLB为6；
[0033] B.向牡蛎粉溶液添加碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶，在温度为50℃恒温酶解2h，在酶解结束后加入0.3倍无壳牡蛎粉重量的的普鲁兰多糖，形成牡蛎酶解液；
[0034] C.对牡蛎酶解液进行灭酶操作，灭酶温度为85℃，调节牡蛎肽酶解液的pH值为5.5，冷却后于8000r/min离心15min，取上清液用分子截留量为500Da的再生纤维素透析袋透析，再进行浓缩干燥得牡蛎肽，制备的牡蛎肽的分子量在1000道尔顿以下。

[0035] 所述碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶的质量比为1:2.5:1.5。
[0036] 所述牡蛎粉溶液与碱性蛋白酶的质量比为1:0.1。
[0037] 实施例2
[0038] A.以新鲜无壳牡蛎粉为原料，分散于pH值7.0的乙酸‑乙酸钠缓冲溶液中，配成质量浓度为6％的牡蛎粉溶液，添加0.5倍无壳牡蛎粉重量的蔗糖脂肪酸酯，蔗糖脂肪酸酯的HLB为8；
[0039] B.向牡蛎粉溶液添加碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶，在温度为55℃恒温酶解2.5h，在酶解结束后加入0.6倍无壳牡蛎粉重量的的普鲁兰多糖，形成牡蛎酶解液；
[0040] C.对牡蛎酶解液进行灭酶操作，灭酶温度为90℃，调节牡蛎肽酶解液的pH值为5.8，冷却后于8500r/min离心15min，取上清液用分子截留量为1000Da的再生纤维素透析袋透析，再进行浓缩干燥得牡蛎肽，制备的牡蛎肽的分子量在1000道尔顿以下。

[0041] 所述碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶的质量比为1:3:2。
[0042] 所述牡蛎粉溶液与碱性蛋白酶的质量比为1:0.15。
[0043] 实施例3
[0044] 本发明牡蛎肽粉的制备方法，包括以下步骤：
[0045] A.以新鲜无壳牡蛎粉为原料，分散于pH值7.5的乙酸‑乙酸钠缓冲溶液中，配成质量浓度为8％的牡蛎粉溶液，添加0.7倍无壳牡蛎粉重量的蔗糖脂肪酸酯，蔗糖脂肪酸酯的HLB为9；
[0046] B.向牡蛎粉溶液添加碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶，在温度为60℃恒温酶解3h，在酶解结束后加入0.9倍无壳牡蛎粉重量的的普鲁兰多糖，形成牡蛎酶解液；
[0047] C.对牡蛎酶解液进行灭酶操作，灭酶温度为95℃，调节牡蛎肽酶解液的pH值为6.0，冷却后于9000r/min离心15min，取上清液用分子截留量为1000Da的再生纤维素透析袋透析，再进行浓缩干燥得牡蛎肽，制备的牡蛎肽的分子量在1000道尔顿以下。

[0048] 所述碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶的质量比为1:4:3。
[0049] 所述牡蛎粉溶液与碱性蛋白酶的质量比为1:0.3。
[0050] 实施例4
[0051] 本发明牡蛎肽粉的制备方法，包括以下步骤：
[0052] A.以新鲜无壳牡蛎粉为原料，分散于pH值6.8的乙酸‑乙酸钠缓冲溶液中，配成质量浓度为6％的牡蛎粉溶液，添加0.6倍无壳牡蛎粉重量的蔗糖脂肪酸酯，蔗糖脂肪酸酯的HLB为8；
[0053] B.向牡蛎粉溶液添加碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶，在温度为55℃恒温酶解2h，在酶解结束后加入0.7倍无壳牡蛎粉重量的的普鲁兰多糖，形成牡蛎酶解液；
[0054] C.对牡蛎酶解液进行灭酶操作，灭酶温度为90℃，调节牡蛎肽酶解液的pH值为5.7，冷却后于9000r/min离心20min，取上清液用分子截留量为1000Da的再生纤维素透析袋透析，再进行浓缩干燥得牡蛎肽，制备的牡蛎肽的分子量在1000道尔顿以下。

[0055] 所述碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶的质量比为1:3.5:2。
[0056] 所述牡蛎粉溶液与碱性蛋白酶的质量比为1:0.15。
[0057] 实施例5
[0058] 一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉，包括以下质量的原料：
[0059] 大豆分离蛋白10kg、花生蛋白粉5kg、牡蛎肽20kg、聚葡萄糖5kg、木糖醇2kg和葡萄糖酸锌1kg。
[0060] 一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
[0061] S1.将上述重量份数的大豆分离蛋白、花生蛋白粉和牡蛎肽混合搅拌，得混合物A；
[0062] S2.将上述重量份数的聚葡萄糖、木糖醇和葡萄糖酸锌混合搅拌，加入体积分数为60～75％的乙醇混合，得混合物B；

[0063] S3.将混合物A加至混合物B中搅拌均匀，搅拌温度为80℃，搅拌速度1000r/min，搅拌时间3min，去除乙醇后，将温度降低至常温，通过真空冷冻干燥得复合肽蛋白质粉，真空冷冻干燥时间为8h，温度为30℃，真空度为150Pa。
[0064] 在本实施例中，牡蛎肽为实施例1制备得到。
[0065] 实施例6
[0066] 一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉，包括以下质量的原料：
[0067] 大豆分离蛋白20kg、花生蛋白粉7kg、牡蛎肽30kg、聚葡萄糖7kg、木糖醇3kg和葡萄糖酸锌2kg。
[0068] 一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
[0069] S1.将上述重量份数的大豆分离蛋白、花生蛋白粉和牡蛎肽混合搅拌，得混合物A；
[0070] S2.将上述重量份数的聚葡萄糖、木糖醇和葡萄糖酸锌混合搅拌，加入体积分数为60～75％的乙醇混合，得混合物B；

[0071] S3.将混合物A加至混合物B中搅拌均匀，搅拌温度为85℃，搅拌速度1200r/min，搅拌时间4min，去除乙醇后，将温度降低至常温，通过真空冷冻干燥得复合肽蛋白质粉，真空冷冻干燥时间为9h，温度为35℃，真空度为180Pa。
[0072] 在本实施例中，牡蛎肽为实施例2制备得到。
[0073] 实施例7
[0074] 一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉，包括以下质量的原料：
[0075] 大豆分离蛋白30kg、花生蛋白粉8kg、牡蛎肽40kg、聚葡萄糖10kg、木糖醇5kg和葡萄糖酸锌3kg。
[0076] 一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
[0077] S1.将上述重量份数的大豆分离蛋白、花生蛋白粉和牡蛎肽混合搅拌，得混合物A；
[0078] S2.将上述重量份数的聚葡萄糖、木糖醇和葡萄糖酸锌混合搅拌，加入体积分数为60～75％的乙醇混合，得混合物B；

[0079] S3.将混合物A加至混合物B中搅拌均匀，搅拌温度为90℃，搅拌速度1500r/min，搅拌时间5min，去除乙醇后，将温度降低至常温，通过真空冷冻干燥得复合肽蛋白质粉，真空冷冻干燥时间为10h，温度为35℃，真空度为200Pa。
[0080] 在本实施例中，牡蛎肽为实施例3制备得到。
[0081] 实施例8
[0082] 一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉，包括以下质量的原料：
[0083] 大豆分离蛋白25kg、花生蛋白粉6kg、牡蛎肽38kg、海洋鱼皮胶原低聚肽粉16kg、聚葡萄糖8kg、木糖醇3kg和葡萄糖酸锌1kg。
[0084] 一种含有牡蛎肽的复合蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
[0085] S1.将上述重量份数的大豆分离蛋白、花生蛋白粉和牡蛎肽混合搅拌，得混合物A；
[0086] S2.将上述重量份数的聚葡萄糖、木糖醇和葡萄糖酸锌混合搅拌，加入体积分数为60～75％的乙醇混合，得混合物B；

[0087] S3.将混合物A加至混合物B中搅拌均匀，搅拌温度为85℃，搅拌速度1400r/min，搅拌时间4min，去除乙醇后，将温度降低至常温，通过真空冷冻干燥得复合肽蛋白质粉，真空冷冻干燥时间为9h，温度为35℃，真空度为160Pa。
[0088] 在本实施例中，牡蛎肽为实施例4制备得到。
[0089] 对比例1
[0090] 与实施例8相比，本对比例的区别在于，牡蛎肽制备过程中不添加蔗糖脂肪酸酯。
[0091] 对比例2
[0092] 与实施例8相比，本对比例的区别在于，牡蛎肽制备过程中不添加普鲁兰多糖。
[0093] 对比例3
[0094] 与实施例8相比，本对比例的区别在于，牡蛎肽制备过程中蔗糖脂肪酸酯的HLB为12。

[0095] 对比例4
[0096] 与实施例8相比，本对比例的区别在于，牡蛎肽制备过程中，使用相同量的异戊四醇硬脂酸酯替换蔗糖脂肪酸酯。
[0097] 对比例5
[0098] 与实施例8相比，本对比例的区别在于，牡蛎肽制备过程中，不含有角蛋白酶，碱性蛋白酶和中性蛋白酶的质量比为3:3.5。
[0099] 对比例6
[0100] 与实施例8相比，本对比例的区别在于，牡蛎肽制备过程中，不含有中性蛋白酶，碱性蛋白酶和角蛋白酶的质量比为2.5:4。
[0101] 试验例一、风味评定
[0102] 从气味(鲜香味，腥味)、口感(腥苦味、异味)和整体可接受度三方面对实施例5～8及对比例1～4制备的复合蛋白粉进行感官评定，随机编号，由10名经过培训的感官评定人员按表1标准评分，分值越大表示风味越优，越易接受，最后评分取平均值，见表2。
[0103] 表1
[0104]评分 整体气味(鲜香味、腥味) 口感(腥苦味、异味) 整体可接受度
5 香气浓郁，无不良气味 无腥苦味，无异味 极易接受
4 有较浓郁的鲜香味，轻微腥味 略有腥苦味，轻微异味 轻易接受
3 牡蛎香味较淡，腥味较淡 腥苦味较淡，异味较淡 大多数人能接受
2 鲜香味几乎没有，腥味明显 腥苦味明显，异味明显 不易接受
1 无鲜味，腥味重 腥味重，异味重 难以接受

[0105] 表2
[0106] 组别 评分平均值实施例5 4.9
实施例6 4.8
实施例7 4.9
实施例8 5.0
对比例1 2.3
对比例2 4.2
对比例3 3.2
对比例4 2.5

[0107] 从表2的数据可知，实施例5～8制备的复合蛋白粉评分平均值均大于4，整体气味香气浓郁，无不良气味，感官评定人员认为口感无腥苦味，无异味，整体上极易接受；其中以实施例8为最佳实施例，评分平均值为5。
[0108] 对比例1不添加蔗糖脂肪酸酯，整体气味上鲜香味几乎没有，腥味明显，腥苦味明显，异味明显，整体上不易接受，说明蔗糖脂肪酸酯的添加可以大大去除牡蛎肽的腥味和异味，增强了复合蛋白粉的风味，推测酶解过程中蔗糖脂肪酸酯减慢了不饱和脂肪酸氧化，使得不容易释放牡蛎原有的海腥物质，阻止了蛋白质酶解产物中大量释放的氨基酸与其他脂肪氧化产物发生反应，以减少酸败的作用，减少牡蛎酶解液色、香、味的不断恶化。
[0109] 对比例2缺少普鲁兰多糖，复合蛋白粉具有较浓郁的鲜香味，轻微腥味，略有腥苦味，轻微异味，能轻易接受，说明添加普鲁兰多糖后降低牡蛎肽的腥味和异味的效果达到最佳，使得牡蛎肽香气浓郁，无不良气味，风味可口。
[0110] 对比例3改变蔗糖脂肪酸酯的HLB为12，其气味、口感和整体可接受度均较差，牡蛎香味较淡，有腥味，其评分较低，说明蔗糖脂肪酸酯的HLB范围大小也会影响到牡蛎肽的风味，从而影响复合蛋白粉的风味，本发明采用蔗糖脂肪酸酯HLB值范围为6～9，其制备的牡蛎肽的气味、口感和整体可接受度均较佳，感官评定人员的评分也较高。
[0111] 对比例4使用异戊四醇硬脂酸酯替换蔗糖脂肪酸酯，制备的复合蛋白粉的气味、口感和整体可接受度达不到实施例5～8的风味效果，与对比例1风味效果类似，说明蔗糖脂肪酸酯是不能随意替换的，本发明在制备牡蛎肽过程中添加蔗糖脂肪酸酯，可以提高牡蛎肽的气味、口感和整体可接受度，风味佳，进而提高复合蛋白粉的风味。
[0112] 试验例二、抗过敏活性检测
[0113] 0.25mmol/LCaCl20.1mL加入0.5mL透明质酸酶溶液(50mg透明质酸酶溶于20mL0.1mol/L醋酸缓冲液中，pH4.01)37℃培养20min；分别加入0.5mL实施例5～8及对比例1～
6制备的含有牡蛎肽的复合蛋白粉相同质量浓度的溶液(60mg/ml)，37℃保温20min；然后在加入0.6mL透明质酸钠(0.6mg/mL)37℃保温20min；加入0.4mol/LNaOH1mL，迅速置于冰上冷却15min；加入0.2mL硼酸，沸水水浴3min，立即冰水冷却5min，加入P‑DAB试剂3mL，37℃保温20min，显色，在585nm下测定OD值。

[0114] 抗过敏活性计算:
[0115]
[0116] 式中:A，对照溶液(酶+缓冲液+底物)的OD值；B，对照空白(缓冲液+缓冲液+底物)的OD值；C，样品(酶+样+底物)的OD值；D，样品空白对照(缓冲液+样+底物)的OD值。结果见表3。

[0117] 表3
[0118] 组别 透明质酸酶的抑制率％实施例5 78.5
实施例6 82.1
实施例7 83.4
实施例8 85.0
对比例1 52.6
对比例2 65.2
对比例3 59.5
对比例4 54.1
对比例5 69.8
对比例6 71.6

[0119] 从表3的数据可知，实施例5～8制备的含有牡蛎肽的复合蛋白粉，具有较高的安全性，作用温和，对透明质酸酶的抑制率较高，抗过敏活性最强，以实施例8透明质酸酶的抑制率最高，可达到85.0％。
[0120] 对比例1～6制备的含有牡蛎肽的复合蛋白粉对透明质酸酶的抑制率较低，抗过敏活性效果均不及实施例5～8，说明适宜HLB的蔗糖脂肪酸酯和普鲁兰多糖相互协同，提高了透明质酸酶的抑制率，增强了复合蛋白粉的抗过敏活性，安全性高。
[0121] 试验例三、测定蛋白质回收率和水解度
[0122] 取实施例1～4及对比例5～6经再生纤维素透析袋透析得到的透析液测定其中的蛋白质回收率和水解度，使用凯氏定氮法测定原料和酶解液的总氮含量，用中性甲醛滴定法测定氨氮含量，蛋白回收率定义为牡蛎酶解液中蛋白总量与原料蛋白总量的比值，水解度定义为牡蛎酶解液中游离氨氮量与原料总氮量的比值，结果见表4。
[0123] 表4
[0124]
[0125]
[0126] 根据表4的数据知，本发明实施例1～4制备的牡蛎肽采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和角蛋白酶三种蛋白酶以特定的比例复配，结合牡蛎酶解液pH值、酶解温度和酶解时间的调节，使得牡蛎酶解液中蛋白质水解度和回收率明显增强，其蛋白质水解度可达到45.89％，回收率可达到92.61％；

[0127] 对比例5或对比例6用相同量的碱性蛋白酶替换角蛋白酶或含有中性蛋白酶，牡蛎酶解液中蛋白质水解度和回收率不高，不及实施1～4的效果，说明蛋白酶类对蛋白质水解度和回收率有着较大影响。
[0128] 上述实施例仅例示性说明本发明的原理及功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

专利地区：广东

专利申请日期：2020-12-02

专利公开日期：2021-10-29

专利公告号：CN202011390526.7