一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法及其应用

专利名称：一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法及其应用

专利类型：发明专利

专利申请号：CN202310251427.8

专利申请（专利权）人：广州杨森药业有限公司
权利人地址：广东省广州市白云区白云湖街夏茅十一社新工业区10号A栋杨森工业园1、2楼

专利发明（设计）人：王杰, 谢建凤

专利摘要：本发明提供了一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法，所述制备方法包括：(1)将发酵培养基灭菌；(2)将茉莉花提取液与发酵培养基混合；(3)将红茶与茉莉花间隔堆叠与步骤(2)得到的灭菌混合液；(4)将植物乳杆菌种子液、青春双歧杆菌种子液接种到步骤(3)得到的混合物中进行发酵；(5)发酵结束后，过滤、灭菌，得到所述茉莉花/红茶发酵滤液。本发明通过特定的培养方式使得制备出来的发酵滤液其中的成分分子量较小，能够更快的对皮肤产生效果；由于本发明为微生物发酵的方式，其成分往往不可控，对于极易过敏的体质来说存在不确定性，本发明通过对培养基的设计，产品具有优异的修护、舒缓、保湿性能。

主权利要求：一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及C12N1/20技术领域，尤其是涉及一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法、滤液、应用。
背景技术
[0002] 目前，茉莉花提取物能消除超氧自由基，能抗氧化，具有抗衰老的作用；同时有很强的渗透力，帮助其他营养成分被皮肤吸收；有一定的酪氨酸酶抑制作用，可辅助美白。
[0003] 红茶，为山茶科植物茶的嫩叶或嫩芽。红茶是以适宜的茶树新牙叶为原料，经萎凋、揉捻(切)、发酵、干燥等一系列工艺过程精制而成的茶，发酵作用使茶叶中的成分产生化学反应，以水冲泡，不仅香气迎人，还呈现出特有的深红茶色，因此被人称为“红茶”。
[0004] 红茶含有维生素、咖啡因、氨基酸、矿物质、多糖、茶多酚等多种营养和功效成分。研究表明，红茶具有辅助降血糖、降血压、降血脂的功效。红茶中的茶色素具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎抑菌、抗突变、抗病毒、除臭等功效。能清热解表；用于急、慢性肠炎，痢疾；急性肝炎，消化不良，衰老等病症。

[0005] CN115105452B公开了一种红茶发酵滤液及其制备方法和应用，开发一种生物发酵制备方法在可以有效溶出红茶中的有效成分的同时对红茶提取液进行多重发酵，实现益生菌与红茶的双向发酵，促使红茶发酵滤液具有较好的保湿、抗衰老、抗炎、抗氧化等护肤效果，克服红茶有效成分溶出率低和红茶产品作用效果得不到有效提升的问题。本申请虽然提出了一种生物发酵红茶的方法，用于去皱方面的功效，但是其并未研究对于敏感体质方面的功效情况。
[0006] CN114145368A公开了一种红茶叶提取物及其制备方法，通过以高含量含有茶褐素，从而具有抗氧化效果、抗老化效果、抗炎效果以及因应激现象受损的皮肤修护效果优秀的优点。同样的本专利也未研究对于敏感体质方面的功效情况。
[0007] 因此，本发明也提供一种适用各种皮肤，同时具有皮肤修护屏障作用的茉莉花/红茶发酵滤液。
发明内容
[0008] 本发明第一方面提供一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法，所述制备方法包括：
[0009] (1)将发酵培养基灭菌；
[0010] (2)将茉莉花提取液与发酵培养基混合；
[0011] (3)将红茶与茉莉花间隔堆叠与步骤(2)得到的灭菌混合液；
[0012] (4)将植物乳杆菌种子液、青春双歧杆菌种子液接种到步骤(3)得到的混合物中进行发酵；
[0013] (5)发酵结束后，过滤、灭菌，得到所述茉莉花/红茶发酵滤液。
[0014] 作为本发明的一种实施方式，所述茉莉花提取液的制备方法如下：
[0015] 茉莉花干花和茉莉茎用去离子水浸泡10h，于95℃温度下加热煎煮提取3次，每次提取3h，每次用三层纱布过滤，合并滤液，滤液的体积加热浓缩至1/4，过滤待用。
[0016] 作为本发明的一种实施方式，所述发酵培养基浓度组成为：蔗糖120‑130g/L，蛋白胨250g/L，NH4Cl1‑3g/L，KCl0.5‑1g/L，KH2PO40.1‑0.2g/L，MgCl2·6H2O0.1‑0.2g/L，CaCl2·2H2O10‑35g/L，柠檬酸2‑4g/L，自然pH，蒸馏水配制。
[0017] 作为本发明的一种实施方式，所述植物乳杆菌种子液的制备方法如下：
[0018] 将植物乳杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速180～220rpm，25～30℃培养36～48h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180～220rpm，25～30℃培养36～48h，得到植物乳杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120‑130g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl1‑3g/L，KCl0.5‑1g/L，KH2PO40.1‑0.2g/L，MgCl2·6H2O0.1‑0.2g/L，CaCl2·2H2O10‑35g/L，柠檬酸2‑4g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0019] 作为本发明的一种实施方式，所述青春双歧杆菌种子液的制备方法如下：
[0020] 将青春双歧杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速180～220rpm，25～30℃培养36～48h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180～220rpm，25～30℃培养36～48h，得到植物乳杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120‑130g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl1‑3g/L，KCl0.5‑1g/L，KH2PO40.1‑0.2g/L，MgCl2·6H2O0.1‑0.2g/L，CaCl2·2H2O10‑35g/L，柠檬酸2‑4g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0021] 作为本发明的一种实施方式，所述步骤(3)中所述红茶与茉莉花间隔堆叠为一层红茶、一层茉莉花间隔堆叠，且每层茉莉花的重量是每层红茶重量的1.3倍。
[0022] 作为本发明的一种实施方式，所述步骤(4)中，发酵条件为所述发酵的温度为30‑38℃，时间为24‑72h；所述发酵的通气量0.1‑0.5vvm；发酵摇床速度为140‑250r/min；所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的共同的接种量为12‑20％(v/v)。

[0023] 作为本发明的一种实施方式，所述步骤(5)中使用12μm滤板对发酵培养基进行过滤，所得滤液80℃灭菌20min，得到所述茉莉花/红茶发酵滤液。
[0024] 本发明第二方面提供所述的茉莉花/红茶发酵滤液在化妆品中的应用。
[0025] 本发明具有如下有益效果：
[0026] 1.本发明通过特定的培养方式使得制备出来的发酵滤液其中的成分分子量较小，能够更快的对皮肤产生效果；
[0027] 2.由于本发明为微生物发酵的方式，其成分往往不可控，对于极易过敏的体质来说存在不确定性，本发明通过对培养基的设计，产品具有优异的修护、舒缓、保湿性能；
[0028] 3.本发明选用茉莉花和红茶叠层堆放发酵的形式，得到的滤液不仅具有香味均衡、清透，滤液澄清透明，更具有良好的保湿、抗衰老、抗炎、抗氧化等护肤效果，功效上相互促进，具有协同增效效果。
附图说明
[0029] 为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0030] 图1：透明质酸酶抑制率实验结果图
[0031] 图2：样品图
[0032] 图3：实施例1的过敏对比图。
具体实施方式
[0033] 下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0034] 本发明第一方面提供一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法，所述制备方法包括：
[0035] (1)将发酵培养基灭菌；
[0036] (2)将茉莉花提取液与发酵培养基混合；
[0037] (3)将红茶与茉莉花间隔堆叠与步骤(2)得到的灭菌混合液；
[0038] (4)将植物乳杆菌种子液、青春双歧杆菌种子液接种到步骤(3)得到的混合物中进行发酵；
[0039] (5)发酵结束后，过滤、灭菌，得到所述茉莉花/红茶发酵滤液。
[0040] 步骤(1)中灭菌的温度为70‑80℃。
[0041] 所述发酵培养基浓度组成为：蔗糖120‑130g/L，蛋白胨250g/L，NH4Cl1‑3g/L，KCl0.5‑1g/L，KH2PO40.1‑0.2g/L，MgCl2·6H2O0.1‑0.2g/L，CaCl2·2H2O10‑35g/L，柠檬酸2‑
4g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0042] 步骤(2)中茉莉花提取液的制备方法如下：茉莉花干花和茉莉茎用去离子水浸泡10h，于95℃温度下加热煎煮提取3次，每次提取3h，每次用三层纱布过滤，合并滤液，滤液的体积加热浓缩至1/4，过滤待用。

[0043] 其中，茉莉花干花和茉莉茎的重量比为4：1；茉莉花提取液与发酵培养基的体积比为1：15。
[0044] 步骤(3)中所述红茶与茉莉花间隔堆叠为一层红茶、一层茉莉花间隔堆叠，且每层茉莉花的重量是每层红茶重量的1.3倍。
[0045] 且红茶和茉莉花堆叠后的重量和灭菌混合液的比例为1：1(Wt/V)。
[0046] 步骤(4)中所述植物乳杆菌种子液的制备方法如下：
[0047] 将植物乳杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速180～220rpm，25～30℃培养36～48h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180～220rpm，25～30℃培养36～48h，得到植物乳杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120‑130g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl1‑3g/L，KCl0.5‑1g/L，KH2PO40.1‑0.2g/L，MgCl2·6H2O0.1‑0.2g/L，CaCl2·2H2O10‑35g/L，柠檬酸2‑4g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0048] 所述青春双歧杆菌种子液的制备方法如下：
[0049] 将青春双歧杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速180～220rpm，25～30℃培养36～48h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180～220rpm，25～30℃培养36～48h，得到植物乳杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120‑130g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl1‑3g/L，KCl0.5‑1g/L，KH2PO40.1‑0.2g/L，MgCl2·6H2O0.1‑0.2g/L，CaCl2·2H2O10‑35g/L，柠檬酸2‑4g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0050] 所述步骤(4)中，发酵条件为所述发酵的温度为30‑38℃，时间为24‑72h；所述发酵的通气量0.1‑0.5vvm；发酵摇床速度为140‑250r/min；所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的共同的接种量为12‑20％(v/v)。所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的接种量比为1.1：1。
[0051] 所述步骤(5)中，使用12μm滤板对发酵培养基进行过滤，所得滤液80℃灭菌20min，得到所述茉莉花/红茶发酵滤液。
[0052] 本发明第二方面提供一种所述的茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法制备得到的茉莉花/红茶发酵滤液。
[0053] 本发明第三方面提供所述的茉莉花/红茶发酵滤液在化妆品中的应用。
[0054] 下面结合具体的实施方式对本发明做进一步的解释说明。
[0055] 实施例1
[0056] 本实施例提供一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法，所述制备方法包括：
[0057] (1)将发酵培养基在70‑80℃下灭菌；
[0058] 发酵培养基浓度组成为：蔗糖125g/L，蛋白胨250g/L，NH4Cl1.5g/L，KCl0.8g/L，KH2PO40.2g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O20g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制；
[0059] (2)将茉莉花提取液与发酵培养基混合；
[0060] 茉莉花提取液的制备方法如下：茉莉花干花和茉莉茎用去离子水浸泡10h，于95℃温度下加热煎煮提取3次，每次提取3h，每次用三层纱布过滤，合并滤液，滤液的体积加热浓缩至1/4，过滤待用。
[0061] 茉莉花干花和茉莉茎的重量比为4：1；茉莉花提取液与发酵培养基的体积比为1：15。

[0062] (3)将红茶与茉莉花间隔堆叠与步骤(2)得到的灭菌混合液；
[0063] 所述红茶与茉莉花间隔堆叠为一层红茶、一层茉莉花间隔堆叠，且每层茉莉花的重量是每层红茶重量的1.3倍。
[0064] 且红茶和茉莉花堆叠后的重量和灭菌混合液的比例为1：1(Wt/V)。
[0065] (4)将植物乳杆菌种子液、青春双歧杆菌种子液接种到步骤(3)得到的混合物中进行发酵；
[0066] 所述植物乳杆菌种子液的制备方法如下：
[0067] 将植物乳杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速190rpm，25℃培养40h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180rpm，25℃培养48h，得到植物乳杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O25g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制。
[0068] 所述青春双歧杆菌种子液的制备方法如下：
[0069] 将青春双歧杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速180rpm，25℃培养48h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180rpm，30℃培养36h，得到植物乳杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O25g/L，柠檬酸2g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0070] 所述发酵的温度为30℃，时间为48h；所述发酵的通气量0.2vvm；发酵摇床速度为180r/min；所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的共同的接种量为18％(v/v)。所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的接种量比为1.1：1。

[0071] (5)发酵结束后，使用12μm滤板对发酵培养基进行过滤，80℃灭菌20min，得到所述茉莉花/红茶发酵滤液。
[0072] 实施例2
[0073] 本实施例提供一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法，所述制备方法包括：
[0074] (1)将发酵培养基在70‑80℃下灭菌；
[0075] 发酵培养基浓度组成为：蔗糖125g/L，蛋白胨250g/L，NH4Cl1.5g/L，KCl0.8g/L，KH2PO40.2g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O20g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制；
[0076] (2)将茉莉花提取液与发酵培养基混合；
[0077] 茉莉花提取液的制备方法如下：茉莉花干花和茉莉茎用去离子水浸泡10h，于95℃温度下加热煎煮提取3次，每次提取3h，每次用三层纱布过滤，合并滤液，滤液的体积加热浓缩至1/4，过滤待用。
[0078] 茉莉花干花和茉莉茎的重量比为4：1；茉莉花提取液与发酵培养基的体积比为1：15。

[0079] (3)将红茶与茉莉花随机混合与步骤(2)得到的灭菌混合液；
[0080] 红茶和茉莉花混合后的重量和灭菌混合液的比例为1：1(Wt/V)。
[0081] (4)将植物乳杆菌种子液、青春双歧杆菌种子液接种到步骤(3)得到的混合物中进行发酵；
[0082] 所述植物乳杆菌种子液的制备方法如下：
[0083] 将植物乳杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速190rpm，25℃培养40h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180rpm，25℃培养48h，得到植物乳杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O25g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制。
[0084] 所述青春双歧杆菌种子液的制备方法如下：
[0085] 将青春双歧杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速180rpm，25℃培养48h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180rpm，30℃培养36h，得到植物乳杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O25g/L，柠檬酸2g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0086] 所述发酵的温度为30℃，时间为48h；所述发酵的通气量0.2vvm；发酵摇床速度为180r/min；所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的共同的接种量为18％(v/v)。所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的接种量比为1.1：1。

[0087] (5)发酵结束后，使用12μm滤板对发酵培养基进行过滤，80℃灭菌20min，得到所述茉莉花/红茶发酵滤液。
[0088] 实施例3
[0089] 本实施例提供一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法，所述制备方法包括：
[0090] (1)将发酵培养基在70‑80℃下灭菌；
[0091] 发酵培养基浓度组成为：蔗糖125g/L，蛋白胨250g/L，NH4Cl1.5g/L，KCl0.8g/L，KH2PO40.2g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O20g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制；
[0092] (2)将茉莉花提取液与发酵培养基混合；
[0093] 茉莉花提取液的制备方法如下：茉莉花干花用去离子水浸泡10h，于95℃温度下加热煎煮提取3次，每次提取3h，每次用三层纱布过滤，合并滤液，滤液的体积加热浓缩至1/4，过滤待用。
[0094] 茉莉花提取液与发酵培养基的体积比为1：15。
[0095] (3)将红茶与茉莉花间隔堆叠与步骤(2)得到的灭菌混合液；
[0096] 所述红茶与茉莉花间隔堆叠为一层红茶、一层茉莉花间隔堆叠，且每层茉莉花的重量是每层红茶重量的1.3倍。
[0097] 且红茶和茉莉花堆叠后的重量和灭菌混合液的比例为1：1(Wt/V)。
[0098] (4)将植物乳杆菌种子液、青春双歧杆菌种子液接种到步骤(3)得到的混合物中进行发酵；
[0099] 所述植物乳杆菌种子液的制备方法如下：
[0100] 将植物乳杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速190rpm，25℃培养40h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180rpm，25℃培养48h，得到植物乳杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O25g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制。
[0101] 所述青春双歧杆菌种子液的制备方法如下：
[0102] 将青春双歧杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速180rpm，25℃培养48h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180rpm，30℃培养36h，得到植物乳杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O25g/L，柠檬酸2g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0103] 所述发酵的温度为30℃，时间为48h；所述发酵的通气量0.2vvm；发酵摇床速度为180r/min；所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的共同的接种量为18％(v/v)。所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的接种量比为1.1：1。

[0104] (5)发酵结束后，使用12μm滤板对发酵培养基进行过滤，80℃灭菌20min，得到所述茉莉花/红茶发酵滤液。
[0105] 实施例4
[0106] 本实施例提供一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法，所述制备方法包括：
[0107] (1)将发酵培养基在70‑80℃下灭菌；
[0108] 发酵培养基浓度组成为：蔗糖125g/L，蛋白胨250g/L，NH4Cl1.5g/L，KCl0.8g/L，KH2PO40.2g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O20g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制；
[0109] (2)将茉莉花提取液与发酵培养基混合；
[0110] 茉莉花提取液的制备方法如下：茉莉花干花和茉莉茎用去离子水浸泡10h，于95℃温度下加热煎煮提取3次，每次提取3h，每次用三层纱布过滤，合并滤液，滤液的体积加热浓缩至1/4，过滤待用。
[0111] 茉莉花干花和茉莉茎的重量比为4：1；茉莉花提取液与发酵培养基的体积比为1：15。

[0112] (3)将红茶与茉莉花间隔堆叠与步骤(2)得到的灭菌混合液；
[0113] 所述红茶与茉莉花间隔堆叠为一层红茶、一层茉莉花间隔堆叠，且每层茉莉花的重量是每层红茶重量的1.3倍。
[0114] 且红茶和茉莉花堆叠后的重量和灭菌混合液的比例为1：1(Wt/V)。
[0115] (4)将植物乳杆菌种子液、青春双歧杆菌种子液接种到步骤(3)得到的混合物中进行发酵；
[0116] 所述植物乳杆菌种子液的制备方法如下：
[0117] 将植物乳杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速190rpm，25℃培养40h，得到植物乳杆菌种子液，所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O25g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0118] 所述青春双歧杆菌种子液的制备方法如下：
[0119] 将青春双歧杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速180rpm，25℃培养48h，得到青春双歧杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O25g/L，柠檬酸2g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0120] 所述发酵的温度为30℃，时间为48h；所述发酵的通气量0.2vvm；发酵摇床速度为180r/min；所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的共同的接种量为18％(v/v)。所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的接种量比为1.1：1。

[0121] (5)发酵结束后，使用12μm滤板对发酵培养基进行过滤，80℃灭菌20min，得到所述茉莉花/红茶发酵滤液。
[0122] 实施例5
[0123] 本实施例提供一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法，所述制备方法包括：
[0124] (1)将发酵培养基在70‑80℃下灭菌；
[0125] 发酵培养基浓度组成为：蔗糖125g/L，蛋白胨250g/L，NH4Cl1.5g/L，KCl0.8g/L，KH2PO40.2g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O20g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制；
[0126] (2)将茉莉花提取液与发酵培养基混合；
[0127] 茉莉花提取液的制备方法如下：茉莉花干花和茉莉茎用去离子水浸泡10h，于95℃温度下加热煎煮提取3次，每次提取3h，每次用三层纱布过滤，合并滤液，滤液的体积加热浓缩至1/4，过滤待用。
[0128] 茉莉花干花和茉莉茎的重量比为4：1；茉莉花提取液与发酵培养基的体积比为1：15。

[0129] (3)将红茶与茉莉花间隔堆叠与步骤(2)得到的灭菌混合液；
[0130] 所述红茶与茉莉花间隔堆叠为一层红茶、一层茉莉花间隔堆叠，且每层茉莉花的重量是每层红茶重量的1.3倍。
[0131] 且红茶和茉莉花堆叠后的重量和灭菌混合液的比例为1：1(Wt/V)。
[0132] (4)将植物乳杆菌种子液、青春双歧杆菌种子液接种到步骤(3)得到的混合物中进行发酵；
[0133] 所述植物乳杆菌种子液的制备方法如下：
[0134] 将植物乳杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速190rpm，25℃培养40h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180rpm，25℃培养48h，得到植物乳杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O25g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0135] 所述青春双歧杆菌种子液的制备方法如下：
[0136] 将青春双歧杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速180rpm，25℃培养48h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180rpm，30℃培养36h，得到植物乳杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O
25g/L，柠檬酸2g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0137] 所述发酵的温度为30℃，时间为48h；所述发酵的通气量0.2vvm；发酵摇床速度为180r/min；所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的共同的接种量为18％(v/v)。所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的接种量比为1.1：1。

[0138] (5)发酵结束后，使用12μm滤板对发酵培养基进行过滤，80℃灭菌20min，得到所述茉莉花/红茶发酵滤液。
[0139] 实施例6
[0140] 本实施例提供一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法，所述制备方法包括：
[0141] (1)将发酵培养基在70‑80℃下灭菌；
[0142] 发酵培养基浓度组成为：蔗糖125g/L，蛋白胨250g/L，NH4Cl1.5g/L，KCl0.8g/L，KH2PO40.2g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O20g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制；
[0143] (2)将茉莉花提取液与发酵培养基混合；
[0144] 茉莉花提取液的制备方法如下：茉莉花干花和茉莉茎用去离子水浸泡10h，于95℃温度下加热煎煮提取3次，每次提取3h，每次用三层纱布过滤，合并滤液，滤液的体积加热浓缩至1/4，过滤待用。
[0145] 茉莉花干花和茉莉茎的重量比为4：1；茉莉花提取液与发酵培养基的体积比为1：15。

[0146] (3)将红茶与茉莉花间隔堆叠与步骤(2)得到的灭菌混合液；
[0147] 所述红茶与茉莉花间隔堆叠为一层红茶、一层茉莉花间隔堆叠，且每层茉莉花的重量是每层红茶重量的1.3倍。
[0148] 且红茶和茉莉花堆叠后的重量和灭菌混合液的比例为1：1(Wt/V)。
[0149] (4)将植物乳杆菌种子液接种到步骤(3)得到的混合物中进行发酵；
[0150] 所述植物乳杆菌种子液的制备方法如下：
[0151] 将植物乳杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速190rpm，25℃培养40h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180rpm，25℃培养48h，得到植物乳杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O25g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制。
[0152] 所述发酵的温度为30℃，时间为48h；所述发酵的通气量0.2vvm；发酵摇床速度为180r/min；所述植物乳杆菌种子液接种量为18％(v/v)。

[0153] (5)发酵结束后，使用12μm滤板对发酵培养基进行过滤，80℃灭菌20min，得到所述茉莉花/红茶发酵滤液。
[0154] 实施例7
[0155] 本实施例提供一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法，所述制备方法包括：
[0156] (1)将发酵培养基在70‑80℃下灭菌；
[0157] 发酵培养基浓度组成为：蔗糖125g/L，蛋白胨250g/L，NH4Cl1.5g/L，KCl0.8g/L，KH2PO40.2g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O20g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制；
[0158] (2)将茉莉花提取液与发酵培养基混合；
[0159] 茉莉花提取液的制备方法如下：茉莉花干花和茉莉茎用去离子水浸泡10h，于95℃温度下加热煎煮提取3次，每次提取3h，每次用三层纱布过滤，合并滤液，滤液的体积加热浓缩至1/4，过滤待用。
[0160] 茉莉花干花和茉莉茎的重量比为4：1；茉莉花提取液与发酵培养基的体积比为1：15。

[0161] (3)将红茶与茉莉花间隔堆叠与步骤(2)得到的灭菌混合液；
[0162] 所述红茶与茉莉花间隔堆叠为一层红茶、一层茉莉花间隔堆叠，且每层茉莉花的重量是每层红茶重量的1.3倍。
[0163] 且红茶和茉莉花堆叠后的重量和灭菌混合液的比例为1：1(Wt/V)。
[0164] (4)将青春双歧杆菌种子液接种到步骤(3)得到的混合物中进行发酵；
[0165] 所述青春双歧杆菌种子液的制备方法如下：
[0166] 将青春双歧杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速180rpm，25℃培养48h；随后取三角瓶内有1/6体积的种子液接入新的三角瓶中，摇床转速180rpm，30℃培养36h，得到青春双歧杆菌；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，燕麦麸皮80g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O25g/L，柠檬酸2g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0167] 所述发酵的温度为30℃，时间为48h；所述发酵的通气量0.2vvm；发酵摇床速度为180r/min；所述青春双歧杆菌种子液的共同的接种量为18％(v/v)。

[0168] (5)发酵结束后，使用12μm滤板对发酵培养基进行过滤，80℃灭菌20min，得到所述茉莉花/红茶发酵滤液。
[0169] 实施例8
[0170] 本实施例提供一种茉莉花/红茶发酵滤液的制备方法，所述制备方法包括：
[0171] (1)将发酵培养基在70‑80℃下灭菌；
[0172] 发酵培养基浓度组成为：蔗糖125g/L，蛋白胨250g/L，NH4Cl1.5g/L，KCl0.8g/L，KH2PO40.2g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O20g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制；
[0173] (2)将茉莉花提取液与发酵培养基混合；
[0174] 茉莉花提取液的制备方法如下：茉莉花干花和茉莉茎用去离子水浸泡10h，于95℃温度下加热煎煮提取3次，每次提取3h，每次用三层纱布过滤，合并滤液，滤液的体积加热浓缩至1/4，过滤待用。
[0175] 茉莉花干花和茉莉茎的重量比为4：1；茉莉花提取液与发酵培养基的体积比为1：15。

[0176] (3)将红茶与茉莉花间隔堆叠与步骤(2)得到的灭菌混合液；
[0177] 所述红茶与茉莉花间隔堆叠为一层红茶、一层茉莉花间隔堆叠，且每层茉莉花的重量是每层红茶重量的1.3倍。
[0178] 且红茶和茉莉花堆叠后的重量和灭菌混合液的比例为1：1(Wt/V)。
[0179] (4)将植物乳杆菌种子液、青春双歧杆菌种子液接种到步骤(3)得到的混合物中进行发酵；
[0180] 所述植物乳杆菌种子液的制备方法如下：
[0181] 将植物乳杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速190rpm，25℃培养40h，得到植物乳杆菌种子液，所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·
2H2O25g/L，柠檬酸3g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0182] 所述青春双歧杆菌种子液的制备方法如下：
[0183] 将青春双歧杆菌接入装有三角瓶中，所述三角瓶内有1/3体积的液体种子培养基，摇床转速180rpm，25℃培养48h，得到青春双歧杆菌种子液；所述液体种子培养基的浓度组成为：蔗糖120g/L，NH4Cl2g/L，KCl0.5g/L，KH2PO40.1g/L，MgCl2·6H2O0.2g/L，CaCl2·2H2O25g/L，柠檬酸2g/L，自然pH，蒸馏水配制。

[0184] 所述发酵的温度为30℃，时间为48h；所述发酵的通气量0.2vvm；发酵摇床速度为180r/min；所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的共同的接种量为18％(v/v)。所述植物乳杆菌种子液和青春双歧杆菌种子液的接种量比为1.1：1。

[0185] (5)发酵结束后，使用12μm滤板对发酵培养基进行过滤，80℃灭菌20min，得到所述茉莉花/红茶发酵滤液。
[0186] 性能测试
[0187] 1.抗皱功效评价，检测依据，按照HMC‑W1‑028弹性蛋白酶抑制率进行测试。
[0188] 茉莉花/红茶发酵滤液：用纯水稀释至样品浓度为5％；
[0189] 阳性对照物(表没食子儿茶素没食子酸酯)：用水稀释至阳性对照物浓度为0.1％；
[0190] 阴性对照物：纯水。
[0191] 试验操作步骤：
[0192] 设计样品组、样品本底组、溶剂组和溶剂本底组，每个组别设立需设立3个平行，在96孔板中分别加入不同试剂溶液，轻轻摇匀，25℃孵育15min后，将其放在酶标仪中，在
410nm处测定吸光值。

[0193] 计算公式
[0194] 弹性蛋白酶抑制率(％)＝(1‑(C‑D)/(A‑B))×100
[0195] 其中，A为不含样品的反应溶液的吸光度；B为不含样品和酶的反应溶液的吸光度；C为含有样品和酶的反应溶液的吸光度；D为含有样品和不含酶的反应溶液的吸光度。

[0196] 统计分析软件为SPSS，试验样品、阳性对照物和阴性对照物弹性蛋白酶抑制率之间的比较采用独立样板t检验。上述统计分析均为双尾检验，显著性水平为α＝0.05，P＞0.05，表示两组之间无显著性差异；P＜0.05，表示两组之间具有显著性差异。

[0197] 表1试验结果表
[0198] 名称 试验结果(％) P值实施例1的发酵滤液 69.371±1.523 ＜0.05
阴性对照 ‑9.150±8.215 /
阳性对照 71.732±3.412 ＜0.05

[0199] 弹性蛋白酶抑制率保留三位小数，P＜0.05，表示样品和阳性对照与阴性对照相比有显著性差异。
[0200] 因此，针对上述操作对实施例1‑8均进行弹性蛋白酶抑制率测试。
[0201] 表2实施例1‑8的弹性蛋白酶抑制率试验结果表(弹性蛋白酶抑制率保留1位小数)[0202]
[0203]
[0204] 2.舒缓功效数据：检测依据，按照HMC‑W1‑029透明质酸酶抑制率进行测试。
[0205] 茉莉花/红茶发酵滤液：用纯水稀释至样品浓度为5％；
[0206] 阳性对照物(甘草酸二钾，纯度≥98％)：用水稀释至阳性对照物浓度为3％；
[0207] 阴性对照物：纯水。
[0208] 试验操作步骤：
[0209] 设计样品组、样品本底组、溶剂组和溶剂本底组，每个组别设立需设立3个平行，分别在四组中加入不同试剂溶液，摇匀，室温放置30min显色，用紫外分光光度计测定波长为528nm处吸光度值。

[0210] 计算公式
[0211] 透明质酸酶抑制率(％)＝(1‑(C‑D)/(A‑B))×100
[0212] 其中，A为不含样品的反应溶液的吸光度；B为不含样品和酶的反应溶液的吸光度；C为含有样品和酶的反应溶液的吸光度；D为含有样品和不含酶的反应溶液的吸光度。

[0213] 统计分析软件为SPSS，试验样品、阳性对照物和阴性对照物透明质酸酶抑制率之间的比较采用独立样板t检验。上述统计分析均为双尾检验，显著性水平为α＝0.05，P＞0.05，表示两组之间无显著性差异；P＜0.05，表示两组之间具有显著性差异。

[0214] 表3试验结果表
[0215]名称 实验结果 P值
实施例1的发酵液 45.155±0.235 ＜0.05
阴性对照 ‑4.111±0.251 /
阳性对照 53.123±4.561 ＜0.05

[0216] 透明质酸酶抑制率保留三位小数，P＜0.05，表示样品和阳性对照与阴性对照相比有显著性差异。
[0217] 因此，针对上述操作对实施例1‑8均进行弹性蛋白酶抑制率测试。
[0218] 表4实施例1‑8的透明质酸酶抑制率试验结果表(弹性蛋白酶抑制率保留1位小数)[0219] 名称 试验结果(％)实施例1 45.2
实施例2 45.1
实施例3 41.3
实施例4 38.1
实施例5 36.5
实施例6 39.9
实施例7 40.4
实施例8 25.2

[0220] 3.过敏性能测试：
[0221] 随机选取8组敏感肌群体，每组10人，其中，这80人分别被确定为接触性敏感肌(用化妆品之后出现的过敏反应)、环境刺激敏感肌(皮肤比较白、干、角质层比较薄)、发红敏感肌(皮肤比较容易红，有灼热感，血管扩张充血)、缺水性敏感肌(皮肤长期缺水造成的皮肤干燥充血)。
[0222] 随后将实施例得到的产品，用蒸馏水稀释至浓度为0.05％，每天早晚涂抹一次，涂抹7天，实验期间不适用其他护肤，根据受试者的皮肤情况分为：过敏皮肤好转、无过敏反应、有轻微过敏反应。
[0223] 名称 试验结果实施例1 过敏皮肤好转
实施例2 过敏皮肤好转
实施例3 过敏皮肤好转
实施例4 有轻微过敏反应
实施例5 无过敏反应
实施例6 过敏皮肤好转
实施例7 过敏皮肤好转
实施例8 有轻微过敏反应

[0224] 最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

专利地区：广东

专利申请日期：2023-03-15

专利公开日期：2023-09-01

专利公告号：CN116211767B