一种超分子泛醇红没药醇及其制备方法与应用

专利名称：一种超分子泛醇红没药醇及其制备方法与应用

专利类型：发明专利

专利申请号：CN202410418547.7

专利申请（专利权）人：深圳杉海创新技术有限公司
权利人地址：广东省深圳市南山区桃源街道福光社区留仙大道3370号南山智园崇文园区2号楼2003

专利发明（设计）人：王振元,张嘉恒,王彪,朱宇翔,李群,韩知璇,盛盈颖,姚远志

专利摘要：本发明公开了一种超分子泛醇红没药醇及其制备方法与应用，该超分子泛醇红没药醇由泛醇、红没药醇和乙氧基二甘醇组成，其中泛醇、红没药醇和乙氧基二甘醇的摩尔比为1~2:1~2:1。本发明提供的制备方法为在惰性气体保护下，将泛醇、红没药醇和乙氧基二甘醇三者混合，加热搅拌至无分层现象，并超声处理，得到该超分子泛醇红没药醇。本发明通过添加乙氧基二甘醇作为第三组份，与泛醇和红没药醇共同形成低共熔溶剂，解决了泛醇和红没药醇不互溶的问题，减弱了红没药醇对细胞的伤害，且兼具了低共熔溶剂的结构可设计性和可调性，促进透皮吸收，从而表现出更佳的修护舒缓功效，也为其在药物制剂方面的应用奠定基础。

主权利要求：
1.一种超分子泛醇红没药醇，其特征在于，所述超分子泛醇红没药醇由泛醇、红没药醇和乙氧基二甘醇组成，所述超分子泛醇红没药醇的化学结构通式为：其中，n为1或2。
2.根据权利要求1所述的超分子泛醇红没药醇，其特征在于，所述超分子泛醇红没药醇中，所述泛醇、红没药醇和乙氧基二甘醇的摩尔比为1:1:1。
3.一种权利要求1或2任一项所述的超分子泛醇红没药醇的制备方法，包括如下制备步骤：S1）在惰性气体保护下，将泛醇、红没药醇和乙氧基二甘醇混合，加热搅拌至静置无分层现象；
S2）保持惰性气体保护，将S1所得的混合溶液超声处理，即得所述超分子泛醇红没药醇。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述惰性气体为氮气，所述氮气压力为0.1 20MPa，所述加热搅拌温度为30 80℃，所述加热搅拌时间为1 24h，~ ~ ~所述加热搅拌转速为100 600rpm。
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5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述惰性气体为氮气，所述氮气压力为10 15MPa，所述加热搅拌温度为50 70℃，所述加热搅拌时间为1 5h，所述加热搅拌转~ ~ ~速为300 600rpm。
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6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述超声处理的超声功率为20 3000W，超声频率为5 100kHz，超声处理时间为1 4h。
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7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述超声处理的超声功率为100 1000~W，超声频率为10 50kHz。
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8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述超声处理的方法为：设定超声功率为100 600W，超声频率为10 50kHz，每超声处理2s后暂停2s，交替持续处理1 4h。
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9.一种权利要求1或2所述的超分子泛醇红没药醇在制备具有保湿修护功效配方护肤产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述超分子泛醇红没药醇在所述配方护肤产品中的质量占比为0.5% 2.5%。
~ 说明书 : 一种超分子泛醇红没药醇及其制备方法与应用技术领域[0001] 本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种超分子泛醇红没药醇及其制备方法与应用。背景技术[0002] 泛酸也称作维生素B5、遍多酸，无臭，味微苦，因其性质偏酸性并广泛存于多种食物中，故而得名。泛酸能够以乙酰辅酶A的形式参加代谢过程；帮助细胞的形成，维持正常发育和中枢神经系统的发育；制造抗体，帮助抵抗传染病，缓和多种抗生素副作用及毒性，并有助于减轻过敏症状；维护头发、皮肤及血液健康。泛酸在中性溶液中对温热、氧化及还原都比较稳定，但酸、碱和干热条件均可以使其分解。而泛醇是泛酸的稳定的羟基同系物，它是一种水溶性的、稳定的、易穿透角质层的小分子，具有保湿、舒缓、修复等功效，当局部应用时，泛醇很容易被吸收并迅速通过酶的作用转化为泛酸，继续发挥泛酸的功效。所以，在生物医药和日化行业大多使用泛醇。[0003] 红没药醇是一种无毒的倍半萜烯醇，可从菊类植物中提取。该成分稳定性好，和皮肤有很好的相容性，可提高皮肤的抗刺激能力，抑制细菌增长，修复有炎症受伤的皮肤，被添加到防晒产品中可提高SPF值。红没药醇在皮肤皮层还具有高渗透性，作用是常用渗透剂的几十倍，可作为主剂或助剂用于防治粉刺一类的皮肤疾病，对皮肤还有调理作用。[0004] 泛醇具备保湿、舒缓、修护等功效，红没药醇具备抗炎、抑菌、促渗、提高皮肤抗刺激性等功效，理论上二者联用，可发挥协同作用，促进活性成分的渗透，提高生物利用度，还能显著降低其刺激性，规避给皮肤造成伤害的风险，实现温和、高效的药物递送。[0005] 但泛醇与红没药醇不互溶，二者联用存在一定困难，其应用尚有待开发。[0006] 低共熔溶剂（DeepEutecticSolvents，简写为DES）是指由一定化学计量比的氢键受体（如季铵盐）和氢键供体（如酰胺、羧酸和多元醇等化合物）组合而成的两组分或三组分低共熔混合物，其凝固点显著低于各个组分纯物质的熔点。低共熔溶剂由Abbott等人于2003年首次报道，其物理化学性质与离子液体非常相似，因此也有人把它归为一类新型离子液体或离子液体类似物，是一种新型的超分子溶剂。但与传统有机溶剂和离子液体相比，低共熔溶剂具有低熔点、低成本、低毒性、易制备、可再生、可生物降解等特点，还具有一般溶剂没有的结构可设计性和可调性的特点，可通过提高活性分子的溶解度，改善活性分子油水分配系数，同时降低渗透阻力等方式，促进活性分子的透皮吸收。[0007] 然而，目前尚没有将泛醇和红没药醇制为低共熔溶剂的相关报导。发明内容[0008] 为了克服现有技术的不足，旨在解决泛醇和红没药醇不互溶、不易制为配方产品的问题，本发明目的之一在于提供一种超分子泛醇红没药醇，其溶解性好，透皮吸收效果佳，生物相容性高，同时无刺激性，应用于配方产品，尤其是功效类护肤产品中具有良好的修复舒缓保湿功效。[0009] 本发明目的之二在于提供一种上述超分子泛醇红没药醇的制备方法。[0010] 本发明目的之三在于提供一种将上述超分子泛醇红没药醇在制备具有保湿修护功效配方护肤产品中的应用。[0011] 本发明目的之一采用如下技术方案实现：[0012] 一种超分子泛醇红没药醇，由泛醇、红没药醇和乙氧基二甘醇组成，该超分子泛醇红没药醇的化学结构通式为： 。[0013] 进一步的，上述的超分子泛醇红没药醇中，泛醇、红没药醇和乙氧基二甘醇的摩尔比为1 2:1 2:1。~ ~[0014] 本发明目的之二采用如下技术方案实现：[0015] 一种超分子泛醇红没药醇的制备方法，包括如下制备步骤：[0016] S1）在惰性气体保护下，将泛醇、红没药醇和乙氧基二甘醇混合，加热搅拌至静置无分层现象；[0017] S2）保持惰性气体保护，将S1所得的混合溶液超声处理，即得所述超分子泛醇红没药醇。[0018] 进一步的，上述的制备方法，在步骤S1中，惰性气体为氮气，氮气压力为0.1 20~MPa，加热搅拌温度为30 80℃，加热搅拌时间为1 24h，加热搅拌转速为100 600rpm。~ ~ ~[0019] 进一步的，上述的制备方法，惰性气体为氮气，氮气压力为10 15MPa，加热搅拌温~度为50 70℃，加热搅拌时间为1 5h，加热搅拌转速为300 600rpm。~ ~ ~[0020] 进一步的，上述的制备方法，在步骤S2中，所述超声处理的超声功率为20 3000W，~超声频率为5 100kHz，超声处理时间为1 4h。~ ~[0021] 进一步的，上述的制备方法，超声处理的超声功率为100 1000W，超声频率为10~ ~50kHz。[0022] 进一步的，上述的制备方法，超声处理的方法为：设定超声功率为100‑600W，超声频率为10‑50kHz，每超声处理2s后暂停2s，交替持续处理1‑4h。[0023] 本发明目的之三采用如下技术方案实现：[0024] 一种含有前述的超分子泛醇红没药醇的保湿修护功效配方护肤产品。[0025] 进一步的，前述的超分子泛醇红没药醇在配方护肤产品中的质量占比为0.5%~2.5%。前述的配方护肤产品可以为无水精华、乳、霜、精华、面膜及其他可行的配方护肤产品。[0026] 本发明的有益效果：本发明通过添加乙氧基二甘醇作为第三组份，在氢键、范德华相互作用等弱相互作用下，将其与泛醇和红没药醇共同形成低共熔溶剂，解决了泛醇和红没药醇不互溶的问题，减弱了红没药醇对细胞的伤害，进一步提高了红没药醇的生物相容性；同时，由于超分子泛醇红没药醇具有低共熔溶剂的结构可设计性和可调性，通过增强泛醇和红没药醇的溶解度，改善油水分配系数，同时降低自身渗透阻力等方式，促进透皮吸收，从而表现出相较于泛醇单体及泛醇红没药醇物理混合物更佳的修护效果，也为泛醇红没药醇在药物制剂方面的联合应用奠定基础。本发明提供的制备方法步骤简单安全，利于工业生产。附图说明[0027] 图1是本发明各实施例超分子泛醇红没药醇的制备流程示意图。[0028] 图2是本发明实施例1制得的超分子泛醇红没药醇各组分的分子分布图。[0029] 图3是本发明实施例1制得的超分子泛醇红没药醇各组分的相互作用力示意图。[0030] 图4是本发明性能测试例（一）各待测样品作用下人成纤维细胞的相对存活率统计图。[0031] 图5‑1是本发明性能测试例（二）不同浓度超分子泛醇红没药醇作用下人角质细胞的相对迁移率统计图。[0032] 图5‑2是本发明性能测试例（二）不同浓度超分子泛醇红没药醇作用下人角质细胞划痕实验结果图。[0033] 图6‑1是本发明性能测试例（二）不同浓度泛醇作用下人角质细胞的相对迁移率统计图。[0034] 图6‑2是本发明性能测试例（二）不同浓度泛醇作用下人角质细胞划痕实验结果图。[0035] 图7‑1是本发明性能测试例（二）不同浓度超分子泛醇红没药醇作用下人成纤维细胞的相对迁移率统计图。[0036] 图7‑2是本发明性能测试例（二）不同浓度超分子泛醇红没药醇作用下人成纤维细胞划痕实验结果图。[0037] 图8‑1是本发明性能测试例（二）不同浓度泛醇作用下人成纤维细胞的相对迁移率统计图。[0038] 图8‑2是本发明性能测试例（二）不同浓度泛醇作用下人成纤维细胞划痕实验结果图。[0039] 图9‑1是本发明性能测试例（三）样品在0.003%浓度下对COX2相对含量检测结果统计图。[0040] 图9‑2是本发明性能测试例（三）样品在0.0015%浓度下对COX2相对含量检测结果统计图。[0041] 图9‑3是本发明性能测试例（三）样品在0.001%浓度下对COX2相对含量检测结果统计图。[0042] 图10‑1是本发明性能测试例（三）样品在0.003%浓度下对IL‑6相对含量检测结果统计图。[0043] 图10‑2是本发明性能测试例（三）样品在0.0015%浓度下对IL‑6相对含量检测结果统计图。[0044] 图10‑3是本发明性能测试例（三）样品在0.001%浓度下对IL‑6相对含量检测结果统计图。[0045] 图11‑1是本发明性能测试例（三）样品在0.007%浓度下对人角质细胞TRPV1蛋白表达结果统计图。[0046] 图11‑2是本发明性能测试例（三）样品在0.0035%浓度下对人角质细胞TRPV1蛋白表达结果统计图。[0047] 图11‑3是本发明性能测试例（三）样品在0.001%浓度下对人角质细胞TRPV1蛋白表达结果统计图。[0048] 图12是本发明性能测试例（四）各样品作用下皮肤经皮水分流失率TEWL统计图。[0049] 图13是本发明性能测试例（四）各样品作用下皮肤角质层含水量变化率统计图。[0050] 图14是本发明性能测试例（四）各样品作用下皮肤泛红 变化率统计图。具体实施方式[0051] 本发明提供一种超分子泛醇红没药醇及其制备方法与应用，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。[0052] 需要说明的是，如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包括”或“包含”为开放式用语，故应解释成“包括但不限定于”。说明书后续描述为实施本申请的较佳实施方式，然而所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本申请的范围。本申请的保护范围当视所附权利要求所界定的范围为准。[0053] 实施例1：S1）在10MPa气压氮气保护下，60℃，300rpm持续搅拌状态下，将1.0当量泛醇、1.0当量红没药醇和1.0当量乙氧基二甘醇混合，搅拌2h至静置无分层现象；[0054] S2）保持10MPa气压氮气保护，设定超声功率300W、超声频率20kHz下，每超声处理2s后暂停2s，交替处理持续1h，即可制得所述超分子泛醇红没药醇。[0055] 对本实施例制得的超分子泛醇红没药醇进行分子对接，其结果如图2所示，根据三维立体结构和计算模拟结果，氢键部分存在于泛醇和红没药醇间，部分存在于泛醇和乙氧基二甘醇间，且泛醇的两组氢键作用位点不相同，具体结构式为：[0056] 同时，对超分子泛醇红没药醇内各组分的相互作用力进行计算分析，其结果如图3所示，泛醇、红没药醇和乙氧基二甘醇三组分间存在明显的氢键、范德华相互作用和其他弱相互作用，多种相互作用共同促进了超分子泛醇红没药醇的形成。[0057] 实施例2：S1）在15MPa气压氮气保护下，50℃，600rpm持续搅拌状态下，将1.0当量泛醇、2.0当量红没药醇和1.0当量乙氧基二甘醇混合，搅拌5h至静置无分层现象；[0058] S2）保持15MPa气压氮气保护，设定超声功率600W、超声频率10kHz下，每超声处理2s后暂停2s，交替处理持续4h，即可制得所述超分子泛醇红没药醇。[0059] 实施例3：S1）在20MPa气压氮气保护下，70℃，300rpm持续搅拌状态下，将2.0当量泛醇、1.0当量红没药醇和1.0当量乙氧基二甘醇混合，搅拌1h至静置无分层现象；[0060] S2）保持20MPa气压氮气保护，设定超声功率1000W、超声频率50kHz下，每超声处理2s后暂停2s，交替处理持续1h，即可制得所述超分子泛醇红没药醇。[0061] 对比例1[0062] S1）在10MPa气压氮气保护下，60℃，300rpm持续搅拌状态下，将1.0当量泛醇、3.0当量红没药醇和1.0当量乙氧基二甘醇混合，搅拌2h至静置无分层现象；[0063] S2）保持10MPa气压氮气保护，设定超声功率300W、超声频率20kHz下，每超声处理2s后暂停2s，交替处理持续1h后，静置24h，溶液分层，无法形成稳定的超分子泛醇红没药醇。[0064] 对比例2[0065] S1）在10MPa气压氮气保护下，60℃，300rpm持续搅拌状态下，将1.0当量泛醇和1.0当量红没药醇混合，搅拌2h后静置分层；[0066] S2）保持10MPa气压氮气保护，设定超声功率300W、超声频率20kHz下，每超声处理2s后暂停2s，交替处理持续1h，二者静置后依旧分层，无法形成低共熔溶剂。[0067] 对比例3[0068] S1）在10MPa气压氮气保护下，60℃，300rpm持续搅拌状态下，将1.0当量泛醇、1.0当量红没药醇和1.0当量丙二醇混合，搅拌2h至静置无分层现象；[0069] S2）保持10MPa气压氮气保护，设定超声功率300W、超声频率20kHz下，每超声处理2s后暂停2s，交替处理持续1h，三者静置后依旧分层，无法形成低共熔溶剂。[0070] 对比例4[0071] 在室温、300rpm持续搅拌的状态下将1.0当量的泛醇和1.0当量的红没药醇加入1.0当量的乙氧基二甘醇中，充分搅拌，制备泛醇红没药醇物理混合物。这种不借助加热和超声处理的方式，仅能在短时间内维持稳定，长时间静置便会分层。[0072] 性能测试：[0073] （一）超分子泛醇红没药醇的生物安全性测试[0074] 通过开展超分子泛醇红没药醇、泛醇红没药醇物理混合物和红没药醇单体对人成纤维细胞的细胞毒性试验，测试样品的生物安全性。以代谢活性为指标测定细胞的存活率，MTT（噻唑蓝）在活细胞内代谢性还原，生成蓝紫色不可溶的甲瓒，活细胞的数目与甲瓒溶于醇类后光度计测定的色度相关。具体实验步骤：[0075] Ⅰ：将人皮肤成纤维细胞悬浮液接种至96孔板，每孔100μL，孵育24h。[0076] Ⅱ：细胞贴壁培养24h后，弃置培养基，每孔加入100μL待测样溶液，设置空白组、阴性组。[0077] Ⅲ：细胞孵育培养24h后，每孔分别加入10μLMTT溶液，置于培养箱中培养4h。[0078] Ⅳ：弃培养液，每孔加入150μLDMSO，震荡10min后用酶标仪测量490nm处吸光值（OD490nm），与未用被试物质处理的对照样品比较并计算结果。[0079] 相对存活率%=[0080] 式中:[0081] 相对存活率——相对OD490nm，%；[0082] TestOD490nm——被试物质的平均OD490nm；[0083] NegOD490nm——阴性对照的平均OD490nm。[0084] 其中，待测样为实施例1制得的超分子泛醇红没药醇，对比例4制得的泛醇红没药醇物理混合物和市售红没药醇。[0085] 超分子泛醇红没药醇、泛醇红没药醇物理混合物和红没药醇单体对人成纤维细胞的细胞毒性如图4所示，超分子泛醇红没药醇的IC50约为7.766mg/mL（95%CI：7.357mg/mL‑8.192mg/mL），IC90约为1.476mg/mL（95%CI：0.000013mg/mL‑3.821mg/mL）；泛醇红没药醇物理混合物的IC50约为5.886mg/mL，IC90约为4.669mg/mL（95%CI：3.8905mg/mL‑5.0003mg/mL）；红没药醇的IC50约为6.124mg/mL，IC90约为4.949mg/mL（95%CI：4.7535mg/mL‑5.1641mg/mL）；在较低浓度范围（0.039mg/mL‑5mg/mL）内，三者的细胞毒性差异不大，当进一步提高浓度至10mg/mL时，超分子泛醇红没药醇组的细胞存活率显著高于其余两组，表明超分子泛醇红没药醇在一定程度上减弱了红没药醇对细胞的伤害，进一步提高了红没药醇的生物相容性。[0086] （二）超分子泛醇红没药醇的体外修护效果测试[0087] 采用细胞划痕法检测待测样的修护功效。细胞划痕法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的迁移能力，可以判断各组细胞迁移的修护能力。其中，待测样为实施例1制得的超分子泛醇红没药醇和市售泛醇单体，阴性对照（NC）与实验组使用含3%血清的培养基，阳性对照（PC）使用含15%血清的培养基。[0088] 采用t检验方法进行分析，检验水准α=0.05；P≥0.05，表示无统计学差异，说明细胞相对迁移率无明显变化；P<0.05，有显著性差异且细胞相对迁移率增加，说明样品有修护功效。具体实验步骤：[0089] Ⅰ：将人角质细胞或成纤维细胞悬浮液接种至24孔细胞培养板，每孔接种500μL，返回培养箱培养18‑24h至细胞融合。[0090] Ⅱ：弃置培养基，更换含有相应样品的培养基，同时在镜下采集图像，记为0h，标记所采集的位置继续培养。[0091] Ⅲ：培养24h时，在所标记的相同位置，采集图片。[0092] Ⅳ：数据分析：采用IPP图像分析软件，分析每个图像划痕区域的面积，以0h为100%，计算相对迁移率。[0093] 超分子泛醇红没药醇在人角质细胞上开展细胞划痕试验，不同组别相对含量检测结果见表1‑1，不同组别相对迁移率比较见图5‑1，组间统计结果见表1‑2，不同组别细胞图像见图5‑2。[0094][0095][0096] 如表1‑2所示，与NC组相比，24h时PC组的相对迁移率增加（P＜0.05），说明本次试验有效；如表1‑1、图5‑1、图5‑2所示，与NC组相比，超分子泛醇红没药醇在0.07mg/mL、0.035mg/mL、0.01mg/mL测试浓度下，相对迁移率均显著增加（P＜0.05），修护率分别为37.75%、27.39%、13.81%，则表示超分子泛醇红没药醇在0.07mg/mL、0.035mg/mL、0.01mg/mL浓度下可促进细胞迁移，达到修护功效。[0097] 泛醇在人角质细胞上开展细胞划痕试验，不同组别相对含量检测结果见表2，不同组别相对迁移率比较见图6‑1，不同组别细胞图像见图6‑2。[0098][0099] 如表2所示，与NC组相比，24h时PC组的相对迁移率增加（P＜0.05），说明本次试验有效；如图6‑1、图6‑2所示，与NC组相比，泛醇在0.07mg/mL、0.035mg/mL、0.01mg/mL测试浓度下，相对迁移率均无显著增加，则表示泛醇在0.07mg/mL、0.035mg/mL、0.01mg/mL浓度下，无促进细胞迁移作用。[0100] 超分子泛醇红没药醇在人成纤维细胞上开展细胞划痕试验，不同组别相对含量检测结果见表3，不同组别相对迁移率比较见图7‑1，不同组别细胞图像见图7‑2。[0101] 如表3所示，与NC组相比，24h时PC组的相对迁移率增加（P＜0.05），说明本次试验有效；如图7‑1、图7‑2所示，与NC组相比，超分子泛醇红没药醇在2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL测试浓度下相对迁移率均显著增加（P<0.05），修护率分别为36.02%、23.96%、18.22%，则表示超分子泛醇红没药醇在2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下，可促进细胞迁移，达到修护功效。[0102] 泛醇在人成纤维细胞上开展细胞划痕试验，不同组别相对含量检测结果见表4，不同组别相对迁移率比较见图8‑1，不同组别细胞图像见图8‑2。[0103][0104] 如表4所示，与NC组相比，24h时PC组的相对迁移率增加（P＜0.05），说明本次试验有效；如图8‑1、图8‑2所示，与NC组相比，泛醇1.25mg/mL、0.625m/mL测试浓度下，相对迁移率无显著增加（P>0.05），则表示泛醇在1.25mg/mL、0.625m/mL浓度下，无促进细胞迁移作用；在2.5mg/ml测试浓度下，相对迁移率显著增加（P＜0.05），修护率为10.45%，则表示泛醇在2.5mg/mL浓度下可促进细胞迁移，达到修护功效。[0105] 综上，超分子泛醇红没药醇在0.07mg/mL、0.035mg/mL、0.01mg/mL的浓度下可促进人角质细胞迁移，达到修护功效，修护率分别为37.75%、27.39%、13.81%。而相同浓度下的泛醇未表现出修护功效；超分子泛醇红没药醇在2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL浓度下，都可以促进人成纤维细胞迁移，达到修护功效，修护率分别为36.02%、23.96%、18.22%。而泛醇在2.5mg/mL浓度下才能促进人成纤维细胞迁移，达到修护功效，且修护率仅为10.45%；相较于泛醇，超分子泛醇红没药醇表现出更佳的修护功效。一方面，红没药醇本身具备一定的修复效果，其与泛醇共同起效，使得超分子泛醇红没药醇具备更佳的修复效果；另一方面，超分子泛醇红没药醇凭借低共熔溶剂结构可设计性和可调性的特点，通过增强泛醇和红没药醇的溶解度，改善油水分配系数，同时降低自身渗透阻力等方式，促进透皮吸收，从而表现出更佳的修护效果。[0106] （三）超分子泛醇红没药醇的舒缓功效测试[0107] 采用LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型和人角质细胞TRPV1蛋白表达测试评估待测样的舒缓功效。其中，待测样为实施例1制得的超分子泛醇红没药醇，对比例4制得的泛醇红没药醇物理混合物和市售泛醇单体。[0108] LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型[0109] LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型是研究炎症因子的经典细胞模型，通过比较造模对照与受试物给药后小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌COX2含量的差异，评价受试物抑制COX2、IL‑6分泌的作用。COX2及IL‑6含量的测定采用酶联免疫方法（ELISA），计算COX2、IL‑6含量。[0110] 检测依据：T/SHRH033‑2020《化妆品舒缓功效测试‑体外TNF‑α炎症因子含量测定脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7测试方法》、PJJC‑SOP3‑44《化妆品舒缓功效测试‑体外IL‑6炎症因子含量测定脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7测试方法标准操作程序》。[0111] 结果判定：采用t检验方法进行分析，检验水准α=0.05；P≥0.05，表示无统计学差异，说明样品无促进炎症因子含量变化作用；P<0.05，有显著性差异且炎症因子含量下降，说明样品有舒缓功效。具体实验步骤：[0112] Ⅰ（细胞铺板）：将小鼠巨噬细胞RAW264.7悬浮液接种至24孔板，孵育24h。[0113] Ⅱ（配液）：根据测试方案（表5）分别配制受试物工作液。[0114][0115] Ⅲ（加药）：根据表5测试方案，进行分组加药，每孔加样1mL，每组3个复孔，作用2h。除NC组加培养基，其他组加含LPS的含药培养基。[0116] Ⅳ（ELISA测试）：收集上清液，按照ELISA试剂盒说明书开展检测。[0117] 结果判定：采用t检验方法进行分析，检验水准α=0.05；P≥0.05，表示无统计学差异，说明样品无促进炎症因子含量变化作用；P<0.05，有显著性差异且炎症因子含量显著降低，说明样品有舒缓功效。[0118] 样品在小鼠巨噬细胞RAW264.7上开展COX2炎症因子含量测定实验，以地塞米松作为对照，不同组别COX2相对含量检测结果见表6‑1、6‑2、6‑3，COX2相对含量对比见图9‑1、9‑2、9‑3，组间统计结果见表7‑1、7‑2、7‑3。[0119][0120][0121][0122][0123][0124] 与NC组相比，M组的COX2相对含量显著上升（P<0.05），说明本次试验刺激条件有效；与M组相比，PC组的COX2相对含量显著下降（P<0.05），说明本次试验有效；如图9‑1、表6‑1和表7‑1所示，与M组相比，样品超分子泛醇红没药醇、泛醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.003%测试浓度下，COX2相对含量均显著下降（P<0.05），抑制率分别为18.27%、7.53%、17.81%，则表示超分子泛醇红没药醇、泛醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.003%浓度下，可抑制COX2分泌，达到舒缓功效；如图9‑2、表6‑2和表7‑2所示，与M组相比，样品超分子泛醇红没药醇、泛醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.0015%测试浓度下COX2相对含量均显著下降（P<0.05），抑制率分别为17.88%、6.21%、14.01%，则表示超分子泛醇红没药醇、泛醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.0015%浓度下，可抑制COX2分泌，达到舒缓功效；如图9‑3、表6‑3和表7‑3所示，与M组相比，样品超分子泛醇红没药醇、泛醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.001%测试浓度下，COX2相对含量均显著下降（P<0.05），抑制率分别为12.86%、4.17%、7.59%，则表示超分子泛醇红没药醇、泛醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.001%浓度下，可抑制COX2分泌，达到舒缓功效。[0125] 综上，样品在0.0015%浓度下，超分子泛醇红没药醇抑制COX2分泌的能力优于泛醇（P<0.05），超分子泛醇红没药醇与泛醇红没药醇物理混合物相比无显著性差异（P＞0.05），则在该浓度下舒缓功效超分子泛醇红没药醇>泛醇；在0.003%、0.001%浓度下，超分子泛醇红没药醇抑制COX2分泌的能力优于泛醇、泛醇红没药醇物理混合物（P<0.05），则在该浓度下舒缓功效超分子泛醇红没药醇>泛醇、泛醇红没药醇物理混合物。[0126] 样品在小鼠巨噬细胞RAW264.7上开展IL‑6含量测定实验，以地塞米松作为对照，不同组别IL‑6相对含量检测结果见表8‑1、8‑2、8‑3，IL‑6相对含量对比图见图10‑1、10‑2、10‑3，组间统计结果见表9。[0127][0128][0129][0130][0131] 与NC组相比，M组的IL‑6相对含量显著升高（P<0.05），说明本次试验刺激条件有效；与M组相比，PC组的IL‑6相对含量显著下降（P<0.05），说明本次试验有效；[0132] 如表8‑1、图10‑1所示，与M组相比，样品泛醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.003%测试浓度下，IL‑6相对含量均无显著变化（P>0.05），则表示泛醇红没药醇物理混合物在0.003%浓度下，无抑制IL‑6分泌作用；超分子泛醇红没药醇在0.003%测试浓度下，IL‑6相对含量显著下降（P<0.05），抑制率为26.32%，则表示超分子泛醇红没药醇在0.003%浓度下，可抑制IL‑6分泌，达到舒缓功效；[0133] 如表8‑2、表8‑3、图10‑2、图10‑3所示，与M组相比，样品超分子泛醇红没药醇、泛醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.0015%、0.001%测试浓度下，IL‑6相对含量均无显著变化（P>0.05），则表示超分子泛醇红没药醇、泛醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.0015%、0.001%浓度下，无抑制IL‑6分泌作用。[0134] 综上，在0.003%浓度下，超分子泛醇红没药醇抑制IL6分泌的能力优于泛醇、泛醇红没药醇物理混合物（P<0.05），则在该浓度下舒缓功效超分子泛醇红没药醇>泛醇、泛醇红没药醇物理混合物。[0135] （2）人角质细胞TRPV1蛋白表达测试[0136] 辣椒素受体是一类分布广泛的离子通道，是导致皮肤灼热、刺痛的关键蛋白。当辣2+椒素等外源性刺激激活TRPV1后，会引起Ca 内流，导致皮肤产生刺痛、灼烧的感觉。样品可通过抑制TRPV1表达，从而发挥舒缓功效。[0137] 结果判定：采用t检验方法进行分析，检验水准α=0.05；P≥0.05，表示无统计学差异，说明样品无抑制TRPV1蛋白含量变化作用；P＜0.05，有显著性差异且TRPV1蛋白含量下降，说明样品有舒缓功效。具体实验步骤：[0138] Ⅰ（细胞铺板）：将人角质细胞悬浮液接种至24孔板，孵育24h。[0139] Ⅱ（配液）：根据测试方案（表10）分别配制受试物工作液。[0140][0141] Ⅲ（加药）：根据表10测试方案，进行分组加药，待24孔板中细胞铺板率达到40%‑60%时，进行分组给药，放入培养箱中培养4h。除NC组，其余组加入辣椒素，放入培养箱继续培养20h。[0142] Ⅳ（荧光检测）：在时间作用终点，进行TRPV1免疫荧光检测，计算TRPV1蛋白平均荧光强度，每孔随机选择1个视野拍照，每组3个复孔。[0143] 样品在人角质细胞上开展试验，检测结果见表11‑1、11‑2、11‑3，不同组别相对含量对比见图11‑1、11‑2、11‑3，组间统计结果见表12‑1、12‑2、12‑3。[0144][0145][0146][0147][0148][0149][0150] 与NC组相比，M组的TRPV1蛋白相对含量显著上升（P<0.05），说明本次试验刺激条件有效；与M组相比，PC组的TRPV1蛋白相对含量显著下降（P<0.05），说明本次试验有效；如图11‑1、表11‑1和表12‑1所示，与M组相比，样品超分子泛醇红没药醇、泛醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.007%测试浓度下TRPV1蛋白相对含量均显著下降（P<0.05），抑制率分别为51.51%、32.39%、24.15%，则表示样品超分子泛醇红没药醇、泛醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.007%浓度下，可抑制辣椒素引起的人角质细胞上TRPV1蛋白过表达，达到舒缓功效；如图11‑2、表11‑2和表12‑2所示，与M组相比，样品超分子泛醇红没药醇、泛醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.0035%测试浓度下，TRPV1蛋白相对含量均显著下降（P<0.05），抑制率分别为44.03%、27.81%、19.01%，则表示样品超分子泛醇红没药醇、泛醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.0035%浓度下，可抑制辣椒素引起的人角质细胞上TRPV1蛋白过表达，达到舒缓功效；如图11‑3、表11‑3和表12‑3所示，与M组相比，样品泛醇在0.001%测试浓度下，TRPV1蛋白相对含量无显著变化（P＞0.05），则表示泛醇在0.001%浓度下，无抑制TRPV1蛋白含量变化作用。样品超分子泛醇红没药醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.001%测试浓度下，TRPV1蛋白相对含量均显著下降（P<0.05），抑制率分别为38.77%、13.44%，则表示样品超分子泛醇红没药醇、泛醇红没药醇物理混合物在0.001%浓度下，可抑制辣椒素引起的人角质细胞上TRPV1蛋白过表达，达到舒缓功效。[0151] 综上，样品在0.007%、0.0035%、0.001%浓度下，超分子泛醇红没药醇抑制TRPV1蛋白表达的能力优于泛醇、泛醇红没药醇物理混合物（P<0.05），则在该浓度下舒缓功效超分子泛醇红没药醇>泛醇、泛醇红没药醇物理混合物。[0152] （四）含超分子泛醇红没药醇的配方产品性能测试：[0153] 使用实施例1制备的超分子泛醇红没药醇和对比例4制得的泛醇红没药醇物理混合物，分别配制成2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳和3%泛醇红没药醇物理混合物精华乳，按质量百分比计，其配方组成如表13所示：[0154] （1）安全性测试：选用合格的斑试器材，以封闭式斑贴试验方法，将受试物0.020 ~0.025g置于斑试器材内，外用低致敏胶带贴敷于受试者前臂曲侧。24小时后去除受试物，分别于去除后0.5、24、48小时观察皮肤反应，按《化妆品安全技术规范》（2015年版）中皮肤反应分级标准记录其结果。[0155][0156][0157][0158] 人体皮肤封闭型斑贴试验结果如表14、表16所示，2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳组和3%泛醇红没药醇物理混合物精华乳组的30个受试者皮肤均未出现不良反应，表现出良好的安全性。[0159] （2）人体修护效果测试[0160] 依据T/GDCA009‑2022化妆品修护功效人体评价方法，对2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳（实验组）和3%泛醇红没药醇物理混合物精华乳（对照组）作用于人脸后经皮水分流失率TEWL进行测试及SPSS处理，以评估其人体修护功效，其结果如表17所示。[0161]1 2[0162] 注：1.平均值表示两组受试者在该时间点所测得的平均值±标准偏差。变化率=（使用后数值‑使用前数值）/使用前数值×100%。[0163] 2.统计方法：采用t检验方法进行分析，“n.s.”（表示无统计学差异），P≥0.05；“ ”（表示差异显著），0.01≤P<0.05；“ ”（表示非常显著），0.001≤P<0.01；“ ”（表示极度显著），P<0.001。[0164] 受试者分别使用2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳（实验组）和3%泛醇红没药醇物理混合物精华乳（对照组）28天，分别在0D、14D、28D采集皮肤数据，对经皮水分流失率TEWL进行正态性验证，统计结果如图12所示：[0165] 使用产品14天、28天时，实验组的TEWL改善率分别为2.45%（P≥0.05）、10.60%（P<0.001），第28天的SPSS数据分析结果差异显著，即2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳（实验组）具有改善皮肤水分流失的效果；对照组的TEWL变化率分别为0.88%（P≥0.05）、‑4.53%（P≥0.05），SPSS数据分析结果无统计学差异，即3%泛醇红没药醇物理混合物精华乳（对照组）不具有改善皮肤水分流失的效果；且28天组间差值数据具有非常显著差异（0.01≤P<0.05），即相较于3%泛醇红没药醇物理混合物精华乳，2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳具有改善TEWL的效果，表现出更佳的人体修复效果。[0166] （3）保湿效果测试[0167] 依据T/GDCA009‑2022化妆品修护功效人体评价方法，对2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳（实验组）和3%泛醇红没药醇物理混合物精华乳（对照组）作用于人脸后角质层含水量进行测试及SPSS处理，以评估其人体保湿功效，其结果如表18所示。[0168] 受试者分别使用2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳（实验组）和3%泛醇红没药醇物理混合物精华乳（对照组）28天，分别在0D、14D、28D采集皮肤数据，对角质层含水量进行正态性验证，统计结果如图13所示：[0169] 使用产品14天、28天时，实验组角质层含水量增加率分别为3.62%（P≥0.05）、12.46%（P<0.001），第28天的SPSS数据分析结果差异极度显著，即2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳（实验组）具有增加皮肤角质层含水量的效果；对照组角质层含水量变化率分别为‑1.36%（P≥0.05）、8.55%（P<0.01），在第28天时SPSS数据分析结果差异非常显著，即3%泛醇红没药醇物理混合物精华乳（对照组）具有增加皮肤角质层含水量的效果；实验组和对照组都具有增加皮肤角质层含水量的效果，但14天、28天组间差值数据比较均无显著差异（P≥0.05），即2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳和3%泛醇红没药醇物理混合物精华乳作用具有相同的保湿效果。[0170] （4）舒缓效果测试[0171] 依据T/GDCA009‑2022化妆品修护功效人体评价方法，对2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳（实验组）和3%泛醇红没药醇物理混合物精华乳（对照组）作用于人脸后泛红 进行测试及SPSS处理，以评估其人体舒缓功效，其统计结果如表18所示：[0172][0173] 受试者分别使用2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳（实验组）和3%泛醇精华乳（对照组）28天，分别在0D、14D、28D采集皮肤数据，对泛红 进行正态性验证，统计结果如图14所示：[0174] 使用产品14天、28天时，实验组泛红 分别显著减少23.30%（p<0.001）、23.47%（P<0.001），第28天的SPSS数据分析结果差异极度显著，即2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳（实验组）具有减少皮肤泛红程度的效果；对照组泛红 分别显著减少28.17%（P<0.001）、27.42%（P<0.001），第28天的SPSS数据分析结果差异极度显著，即3%泛醇红没药醇物理混合物精华乳（对照组）具有减少皮肤泛红程度的效果；14天、28天组间差值数据比较均无显著差异（P≥0.05），即2.5%超分子泛醇红没药醇精华乳和3%泛醇红没药醇物理混合物精华乳具有相同的舒缓功效。[0175] 应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

专利地区：广东

专利申请日期：2024-04-09

专利公开日期：2024-06-28

专利公告号：CN118005529B