一种刺五加提取物注射液及其制备方法发明专利

专利名称：一种刺五加提取物注射液及其制备方法

专利类型：发明专利

专利申请号：CN202311290115.4

专利申请（专利权）人：黑龙江金九药业股份有限公司
权利人地址：黑龙江省鸡西市密山市裴德镇

专利发明（设计）人：王占明,魏天龙,薛力强,吴海波,赫英东,侯艳华

专利摘要：本发明属于药物技术领域，具体涉及一种刺五加提取物注射液及其制备方法。制备过程包括以下步骤：对刺五加的茎进行提取，得到刺五加提取物，然后进行纯化，制备刺五加注射液；所述纯化的步骤包括，大孔树脂柱层析分离和硅胶柱层析分离；纯化液依次经绢布过滤、聚醚砜滤芯过滤和超滤器超滤后进行浓配、稀配、灌封、灭菌和灯检制得刺五加注射液。本发明制备得到的注射液，规格20mL，有效成分包括4.5‑5.5mg/mL的总黄酮、0.7‑1.0mg/mL的紫丁香苷和0.3‑0.5mg/mL的刺五加苷E，稳定性更好。

主权利要求：
1.一种刺五加提取物注射液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：对刺五加的茎进行提取，得到刺五加提取物，然后进行纯化，制备刺五加提取物注射液；
所述纯化的步骤为：
（1）大孔树脂柱层析分离：所述大孔吸附树脂层析柱为：上层为D‑101、中层为NKA和下层为HPD750组成的层析柱；刺五加提取物以水洗脱6‑8个保留体积，再以乙醇洗脱6‑8个保留体积，收集乙醇洗脱液，浓缩，得刺五加浓缩液；
（2）硅胶柱层析分离：刺五加浓缩液中加入200‑300目硅胶，拌样后经硅胶柱层析用4‑6倍柱体积的乙酸乙酯、三氟乙酸和丙酮的混合溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，加水溶解，得刺五加纯化液；
其中，步骤（1）中所述D‑101、NKA和HPD750的厚度比为1:1‑2:1‑2；所述乙醇为pH＝3‑5的60‑70wt%的乙醇；
所述刺五加提取物注射液的制备过程包括以下步骤：
S1、浓配：将刺五加纯化液依次经绢布过滤、聚醚砜滤芯过滤和超滤器超滤，倒入浓配罐，加水定容，加入活性炭，加热，搅拌，得到混合液1；
S2、稀配：混合液1降温后，依次经板框过滤器过滤和分子量为8‑10KD的超滤器超滤至稀配罐，加水定容，调pH，搅拌，取样检测合格后加水至全量，得到注射液中间品；
S3、灌封：将检测合格的注射液中间品进行过滤后灌封；
S4、灭菌：115‑116℃灭菌30‑40min；
S5、灯检，贴签，包装，即得；
其中，步骤S1中所述超滤器超滤包括：依次经过分子量为90‑100KD的超滤器和分子量为10‑30KD的超滤器；
步骤S1中定容至浓配罐体积的65‑75%，加入活性炭，所述活性炭的添加量为0.2g/mL；
所述加热的温度为90‑100℃，加热的时间为15‑25min。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述乙酸乙酯、三氟乙酸和丙酮的体积比为80‑89:10‑20:1。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述绢布的孔径为100‑500目；所述聚醚砜滤芯的孔径为0.22μm‑0.8μm。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中降温后的温度为60‑70℃；定容至稀配罐体积的80‑90%，所述调pH的试剂为质量浓度为30‑40%的NaOH溶液，调节pH至4‑
6。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述刺五加提取物的制备方法包括以下步骤：
1）取刺五加的茎，粉碎成2‑10cm的段，依次在100‑120℃和80‑110℃干燥，蒸汽压力＜
0.4MPa，得到刺五加净药材；
2）取刺五加净药材，加6‑8倍量的水煎煮，煎煮温度为95‑105°C，煎煮时间为2‑4h，煎煮
2次，超声和微波联合辅助提取，超声功率280‑320w，微波功率180‑220w，过滤，得滤液A；
3）用石灰乳调节滤液A的pH值至10‑12，搅拌，转速为45‑55r/min，时间为4‑6min，用质量分数为15‑25％的硫酸继续调节滤液A的pH值至4‑6，搅拌，转速为45‑55r/min，时间为8‑
12min，静置4h以上，取上层清液，得溶液B；
4）将溶液B浓缩至75‑85°C时相对密度1.05‑1.20，加入体积分数为85‑95％的乙醇溶液至含醇量80‑90％，静置12h以上，过滤，即得。
6.一种权利要求1‑5任一项所述的制备方法制得的刺五加提取物注射液，其特征在于，所述刺五加提取物注射液中包括4.5‑5.5mg/mL的总黄酮、0.7‑1.0mg/mL的紫丁香苷和0.3‑
0.5mg/mL的刺五加苷E。 说明书 : 一种刺五加提取物注射液及其制备方法技术领域[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及一种刺五加提取物注射液及其制备方法。背景技术[0002] 刺五加根茎和叶具有特殊香气，其味微苦、稍辛，归脾、肾、心经，具有益气健脾、补肾安神的功效，尤其在抗疲劳、抗炎、抗应激和增强免疫力方面有显著作用，同时对心血管、糖尿病和神经衰弱等方面疾病有一定疗效。[0003] 刺五加注射液是由五加科植物刺五加中提出的有效成分制成的中药注射液，其中含有多种刺五加苷、异秦皮苷、丁香苷、金丝桃苷、刺五加多糖等有效成分。刺五加能调节机体新陈代谢的功能，提高机体对有害刺激因子的非特异性抵抗力，能增强垂体‑肾上腺皮质系统的功能，提高机体的适应性和耐受性，减低体内外多种致病因子对机体的损害，对中枢神经系统即有兴奋作用又有抑制作用。刺五加注射液可扩张血管、增加冠状动脉血流量、减少耗氧量、降低血液粘度、改善血液循环，并有镇静、改善睡眠、增加食欲等作用。主要用于肝肾不足所致的短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化、脑血栓形成、脑栓塞等。[0004] 近年来由于其在临床上广泛的应用所引起的不良反应时有报道。其不良反应类型主要有过敏反应、过敏性休克、全身性过敏反应等，临床主要表现为头晕、头痛、胸闷、呼吸困难、血压下降、烦躁，部分患者伴有皮疹、全身瘙痒、发热、寒战、鼻塞、流涕等。[0005] 中国发明专利申请201610646228.7公开了一种提高刺五加药物注射制剂稳定性的组合物制备方法，包括下述步骤：(1)称取刺五加的提取液2g‑40g、苯甲酸和/或苯甲酸钠5mg‑3g；(2)苯甲酸、苯甲酸钠分别配制成5mg/100ml‑3g/100ml的溶液，备用；(3)刺五加的提取液加入30℃‑40℃的注射用水500ml中，搅拌至完全溶解后，加入的活性炭，所述活性炭用量为0.02g/100ml，搅拌15min，过滤脱碳；(4)步骤(3)所得滤液用步骤(2)配置的苯甲酸和/或苯甲酸钠溶液调节pH值为5.0‑7.0，加入30℃‑40℃的注射用水至1000ml；(5)将步骤(4)所得药液过滤至澄清，灌装，灭菌，即得。但是刺五加与其他辅料配伍容易产生的副作用。[0006] 中国发明专利申请CN200310125129.7公开了将刺五加药材先用乙醇回流提取，提取液用大孔吸附树脂吸附，用水洗脱去杂质后，再用20％‑70％的乙醇洗脱，收集20％‑70％的乙醇洗脱部位，减压回收乙醇至干，得刺五加总苷类组分；将醇提后的刺五加药渣，用水加热提取三次，水提液合并，浓缩，减压回收乙醇至干，得刺五加总苷类组分；将醇提后的刺五加药渣，用水加热提取三次，水提液合并，浓缩，反复醇沉三次，沉淀加水使溶解，配成1％的溶液，过截留分子量介于6000‑20万的中空纤维柱超滤，截留浓缩液真空低温干燥或冷冻干燥，得到多糖有效组分。该方法是分开提取刺五加苷类和多糖类成分，步骤较多，工艺较繁琐，提取周期长。[0007] 中国发明专利申请CN201610648413公开了一种刺五加组合物的提取方法，先是水提醇沉，然后采用乙醇/盐双水相萃取方法对浓缩滤液进行萃取，收集乙醇相，减压蒸馏，真空干燥，即得。该方法制得的提取物组合物不含糖类、新绿原酸、隐绿原酸等有效成分。研究表明刺五加糖类具有免疫调节作用，绿原酸类具有抗菌解热、抗血栓、抗炎、抑制血小板聚集等作用。中药药效物质是一个复杂的化学成分体系，具有多成分多靶点的中药提取物组合物是中医药治病的主要形式，所以在刺五加提取时，兼顾糖类与绿原酸类成分是非常必要的。发明内容[0008] 本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种稳定性好、有效成分含量高、制备简单的刺五加提取物注射液及其制备方法。[0009] 为了达到本发明的上述目的，本发明采用的具体技术方案为：[0010] 一种刺五加提取物注射液的制备方法，包括以下步骤：对刺五加的茎进行提取，得到刺五加提取物，然后进行纯化，制备刺五加提取物注射液；[0011] 所述纯化的步骤包括：[0012] (1)大孔树脂柱层析分离：所述大孔吸附树脂层析柱为：上层为D‑101、中层为NKA和下层为HPD750组成的层析柱；刺五加提取物以水洗脱6‑8个保留体积，再以乙醇洗脱6‑8个保留体积，收集乙醇洗脱液，浓缩，得刺五加浓缩液；[0013] (2)硅胶柱层析分离：刺五加浓缩液中加入200‑300目硅胶，拌样后经硅胶柱层析用4‑6倍柱体积的乙酸乙酯、三氟乙酸和丙酮的混合溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，加水溶解，得刺五加纯化液。[0014] 优选地，步骤(1)中所述D‑101、NKA和HPD750的厚度比为1:1‑2:1‑2；所述乙醇为pH＝3‑5的60‑70wt％的乙醇。[0015] 优选地，步骤(2)中所述乙酸乙酯、三氟乙酸和丙酮的体积比为80‑89:10‑20:1。[0016] 优选地，所述刺五加注射液的制备过程包括以下步骤：[0017] S1、浓配：将刺五加纯化液依次经绢布过滤、聚醚砜滤芯过滤和超滤器超滤，倒入浓配罐，加注射用水定容，加入活性炭，加热，搅拌，得到混合液1；[0018] S2、稀配：混合液1降温后，依次经板框过滤器过滤和分子量为8‑10KD的超滤器超滤至稀配罐，加注射用水定容，调pH，搅拌，取样检测合格后加入注射用水至全量，得到注射液中间品；[0019] S3、灌封：将检测合格的注射液中间品进行过滤后灌封；[0020] S4、灭菌：115‑116℃灭菌30‑40min；[0021] S5、灯检，贴签，包装，即得。[0022] 进一步优选地，步骤S1中所述绢布的孔径为100‑500目；所述聚醚砜滤芯的孔径为0.22μm‑0.8μm。[0023] 进一步优选地，步骤S1中所述超滤器超滤包括：依次经过分子量为90‑100KD的超滤器和分子量为10‑30KD的超滤器。[0024] 进一步优选地，步骤S1中定容至浓配罐体积的65‑75％，加入活性炭，所述活性炭的添加量为0.2g/mL；所述加热的温度为90‑100℃，加热的时间为15‑25min。[0025] 进一步优选地，步骤S2中降温后的温度为60‑70℃；定容至稀配罐体积的80‑90％，所述调pH的试剂为质量浓度为30‑40％的NaOH溶液，调节pH至4‑6。[0026] 优选地，所述刺五加提取物的制备方法包括以下步骤：[0027] 1)取刺五加的茎，粉碎成2‑10cm的段，依次在100‑120℃和80‑110℃干燥，蒸汽压力＜0.4MPa，得到刺五加净药材；[0028] 2)取刺五加净药材，加6‑8倍量的水煎煮，煎煮温度为95‑105℃，煎煮时间为2‑4h，煎煮2次，超声和微波联合辅助提取，超声功率280‑320w，微波功率180‑220w，过滤，得滤液A；[0029] 3)用石灰乳调节滤液A的pH值至10‑12，搅拌，转速为45‑55r/min，时间为4‑6min，用质量分数为15‑25％的硫酸继续调节滤液A的pH值至4‑6，搅拌，转速为45‑55r/min，时间为8‑12min，静置4h以上，取上层清液，得溶液B；[0030] 4)将溶液B浓缩至75‑85℃时相对密度1.05‑1.20，加入体积分数为85‑95％的乙醇溶液至含醇量80‑90％，静置12h以上，过滤，即得。[0031] 刺五加净药材的制备：挑选去除非刺五加中杂质和霉变的成分，净选后的药材用高压水枪冲洗至无灰尘，按《93ZR‑8.0B型铡切揉搓机标准操作规程》进行操作，粉碎至2‑10cm的段，粉碎后按照《带式干燥机标准操作规程》进行烘干，高温段温度控制在100‑120℃，低温段温度控制在80‑110℃，蒸汽压力不得超过0.4MPa，干燥时间控制在13‑15min(电机频率50Hz)。[0032] 本发明还涉及上述制备方法制得的刺五加提取物注射液，所述刺五加提取物注射液的规格为每支20mL，所述刺五加提取物注射液中包括4.5‑5.5mg/mL的总黄酮、0.7‑1.0mg/mL的紫丁香苷和0.3‑0.5mg/mL的刺五加苷E。[0033] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：[0034] (1)本发明刺五加提取物注射液有效成分含量高，包括4.5‑5.5mg/mL的总黄酮、0.7‑1.0mg/mL的紫丁香苷和0.3‑0.5mg/mL的刺五加苷E；[0035] (2)本发明的刺五加提取物注射液稳定性进一步提高。附图说明[0036] 图1是本发明中刺五加提取物注射液(每支20mL)的制备流程图。具体实施方式[0037] 对本发明实施例中的技术方案作进一步清晰地描述，所描述的实施例只是本发明的一部分，用于解释本发明，但不用于限定本发明，因此本领域其他技术人员在没有创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明的保护范围。[0038] 实施例1[0039] 1.刺五加提取液的制备：[0040] 1)取刺五加的茎，粉碎成5cm的段，依次在110℃和90℃分别干燥7min，蒸汽压力为0.2MPa，得到刺五加净药材；[0041] 2)取刺五加净药材，加8倍量的水煎煮，煎煮温度为100℃，煎煮时间为3h，煎煮2次，超声和微波联合辅助提取，超声功率300w，微波功率200w，过滤，得滤液A；[0042] 3)用石灰乳调节滤液A的pH值至10，搅拌，转速为50r/min，时间为5min，用质量分数为20％的硫酸继续调节滤液A的pH值至5，搅拌，转速为50r/min，时间为10min，静置5h，取上层清液，得溶液B；[0043] 4)将溶液B浓缩至80℃时相对密度1.20，加入体积分数为90％的乙醇溶液至含醇量85％，静置14h，过滤，即得。[0044] 2.刺五加纯化液的制备：[0045] (1)大孔树脂柱层析分离：刺五加提取液经过上层为D‑101、中层为NKA和下层为HPD750组成的层析柱，其中，D‑101、NKA和HPD750的厚度比为1:2:2；以水洗脱8个保留体积，再以pH＝5的70wt％乙醇洗脱8个保留体积，收集乙醇洗脱液，浓缩，得浓缩液A；[0046] (2)硅胶柱层析分离：浓缩液A加入适量200‑300目硅胶，拌样后经硅胶柱层析用5倍柱体积的乙酸乙酯、三氟乙酸和丙酮的混合溶液(乙酸乙酯、三氟乙酸和丙酮的体积比为80:19:1)洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，加注射用水溶解，得刺五加纯化液。[0047] 3.刺五加提取物注射液(每支20mL，含总黄酮类物质100mg)的制备流程如图1所示，制备过程如下：[0048] S1、浓配：将刺五加纯化液依次经300目绢布过滤、0.4μm聚丙烯滤芯过滤、100KD分子量超滤器和30KD分子量超滤器超滤后，倒入浓配罐，加注射用水定容至全量的70％，加入0.2g/mL的活性炭，加热至100℃，搅拌20min，得到混合液1；[0049] S2、稀配：混合液1降温至70℃，依次经板框过滤器(两层滤纸、两层0.45μm滤膜)过滤和分子量为10KD的超滤器超滤至稀配罐，加注射用水，定容至全量的85％，加入质量浓度为40％的NaOH溶液调pH值至5.0，搅拌20min，取样检测合格后加入注射用水至全量，得到注射液中间品；[0050] S3、灌封：将检测合格的注射液中间品经0.22μm滤芯精滤，灌装20mL，封口；[0051] S4、灭菌：115℃灭菌40min；[0052] S5、灯检，贴签，包装，即得。[0053] 实施例2[0054] 1.刺五加提取液的制备[0055] 1)取刺五加的茎，粉碎成8cm的段，依次在100℃和80℃分别干燥7min，蒸汽压力为0.3MPa，得到刺五加净药材；[0056] 2)取刺五加净药材，加6倍量的水煎煮，煎煮温度为105℃，煎煮时间为2h，煎煮2次，超声和微波联合辅助提取，超声功率320w，微波功率220w，过滤，得滤液A；[0057] 3)用石灰乳调节滤液A的pH值至10，搅拌，转速为45r/min，时间为6min，用质量分数为25％的硫酸继续调节滤液A的pH值至6，搅拌，转速为55r/min，时间为8min，静置10h，取上层清液，得溶液B；[0058] 4)将溶液B浓缩至85℃时相对密度1.05，加入体积分数为85％的乙醇溶液至含醇量90％，静置24h，过滤，即得。[0059] 2.刺五加纯化液的制备：[0060] (1)大孔树脂柱层析分离：刺五加提取液经过上层为D‑101、中层为NKA和下层为HPD750组成的层析柱，其中，D‑101、NKA和HPD750的厚度比为1:1:1；以水洗脱6个保留体积，再以pH＝3的60wt％乙醇洗脱8个保留体积，收集乙醇洗脱液，浓缩，得浓缩液A；[0061] (2)硅胶柱层析分离：浓缩液A加入适量200‑300目硅胶，拌样后经硅胶柱层析用6倍柱体积的乙酸乙酯、三氟乙酸和丙酮的混合溶液(乙酸乙酯、三氟乙酸和丙酮的体积比为89:10:1)洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，加注射液用水溶解，得刺五加纯化液。[0062] 3.刺五加注提取物射液(每支20mL，含总黄酮类物质100mg)的制备：[0063] S1、浓配：将刺五加纯化液依次经500目绢布过滤、0.22μm聚丙烯滤芯过滤、100KD分子量超滤器和10KD分子量超滤器超滤后，倒入浓配罐，加注射用水定容至全量的65％，加入0.15g/mL的活性炭，加热至90℃，搅拌25min，得到混合液1；[0064] S2、稀配：混合液1降温至60℃，依次经板框过滤器(两层滤纸、两层0.45μm滤膜)过滤和分子量为10KD的超滤器超滤至稀配罐，加注射用水，定容至全量的90％，加入质量浓度为30％的NaOH溶液调pH值至4.0，搅拌25min，取样检测合格后加入注射用水至全量，得到注射液中间品；[0065] S3、灌封：将检测合格的注射液中间品经0.22μm滤芯精滤，灌装20mL，封口；[0066] S4、灭菌：116℃灭菌30min；[0067] S5、灯检，贴签，包装，即得。[0068] 实施例3[0069] 1.刺五加提取液的制备过程与实施例1一致。[0070] 2.刺五加纯化液的制备：[0071] (1)大孔树脂柱层析分离：刺五加提取液经过上层为D‑101、中层为NKA和下层为HPD750组成的层析柱，其中，D‑101、NKA和HPD750的厚度比为1:1:2；以水洗脱6个保留体积，再以pH＝5的70wt％乙醇洗脱7个保留体积，收集乙醇洗脱液，浓缩，得浓缩液A；[0072] (2)硅胶柱层析分离：浓缩液A加入适量200‑300目硅胶，拌样后经硅胶柱层析用4倍柱体积的乙酸乙酯、三氟乙酸和丙酮的混合溶液(乙酸乙酯、三氟乙酸和丙酮的体积比为85:14:1)洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，加注射用水溶解，得刺五加纯化液。[0073] 3.刺五加提取物注射液(每支20mL，含总黄酮类物质100mg)的制备：[0074] S1、浓配：将刺五加纯化液依次经100目绢布过滤、0.8μm聚丙烯滤芯过滤、100KD分子量超滤器和20KD分子量超滤器超滤后，倒入浓配罐，加注射用水定容至全量的75％，加入0.25g/mL的活性炭，加热至100℃，搅拌15min，得到混合液1；[0075] S2、稀配：混合液1降温至65℃，依次经板框过滤器(两层滤纸、两层0.45μm滤膜)过滤和分子量为10KD的超滤器超滤至稀配罐，加注射用水，定容至全量的80％，加入质量浓度为40％的NaOH溶液调pH值至6.0，搅拌15min，取样检测合格后加入注射用水至全量，得到注射液中间品；[0076] S3、灌封：将检测合格的注射液中间品经0.22μm滤芯精滤，灌装20mL，封口；[0077] S4、灭菌：115℃灭菌30min；[0078] S5、灯检，贴签，包装，即得。[0079] 对比例1[0080] 1.刺五加提取液的制备过程与实施例1一致。[0081] 2.刺五加纯化液的制备过程与实施例1相同，区别仅在于：[0082] (1)大孔树脂柱层析分离：刺五加提取液经过上层为D‑101，下层为HPD750组成的层析柱，其中，填料总量与实施例1一致，D‑101和HPD750的厚度比为1:4；以水洗脱6个保留体积，再以pH＝5的70wt％乙醇洗脱7个保留体积，收集乙醇洗脱液，浓缩，得浓缩液A。[0083] 其他步骤与实施例1一致。[0084] 3.刺五加提取物注射液(每支20mL，含总黄酮类物质100mg)的制备过程与实施例1一致。[0085] 对比例2[0086] 1.刺五加提取液的制备过程与实施例1一致。[0087] 2.刺五加纯化液的制备过程与实施例1相同，区别仅在于：[0088] (1)大孔树脂柱层析分离：刺五加提取液经过HPD750层析柱，填料总量与实施例1一致，以水洗脱6个保留体积，再以pH＝5的70wt％乙醇洗脱7个保留体积，收集乙醇洗脱液，浓缩，得浓缩液A；[0089] 其他步骤与实施例1一致。[0090] 3.刺五加提取物注射液(每支20mL，含总黄酮类物质100mg)的制备过程与实施例1一致。[0091] 对比例3[0092] 1.刺五加提取液的制备过程与实施例1一致。[0093] 2.刺五加纯化液的制备过程与实施例1相同，区别仅在于：[0094] (2)硅胶柱层析分离：浓缩液A加入适量200‑300目硅胶，拌样后经硅胶柱层析第一次用3倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，第二次用6倍柱体积的乙酸乙酯和丙酮的混合溶液(乙酸乙酯和丙酮的体积比为99:1)洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得刺五加浓缩物；[0095] 其他步骤与实施例1一致。[0096] 3.刺五加提取物注射液(每支20mL，含总黄酮类物质100mg)的制备过程与实施例1一致。[0097] 对比例4[0098] 1.刺五加提取液的制备过程与实施例1一致。[0099] 2.刺五加纯化液的制备过程与实施例1相同，区别仅在于：[0100] (3)刺五加浓缩物加水溶解，依次经300目绢布过滤、0.4μm聚丙烯滤芯过滤和30KD分子量超滤器超滤后，5℃冷藏，得到刺五加纯化液。[0101] 3.刺五加提取物注射液(每支20mL，含总黄酮类物质100mg)的制备过程与实施例1一致。[0102] 对比例5[0103] 中国专利申请CN201910570805.2中实施例4公开的注射液。[0104] 效果测试[0105] 测试例1刺五加提取物注射液质量检测[0106] 1.测试方法：[0107] (1)总黄酮：以芦丁为对照品，依照分光光度法(中国药典2010年版一部附录附录VA)，在510nm波长处测定吸收度，计算刺五加注射液中总黄酮的含量；[0108] (2)紫丁香苷和刺五加苷E[0109] 依照中国药典2010版附录VID进行测定。采用ACQUITYUPLCBEHC18(2.1×100mm，1.7μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，以体积分数为0.1％磷酸溶液为流动相B，柱温为40℃；流速为0.3mL/min；检测波长为220nm。梯度洗脱：0min时，5％的流动相A和95％的流动相B；3.2min时，9.2％的流动相A和90.8％的流动相B；10.0min时，22％的流动相A和78％的流动相B；12min时，100％的流动相A；15min时，5％的流动相A和95％的流动相B。[0110] (3)指纹图谱检查[0111] 依照高效液相色谱法(2010年版中国药典一部附录VID)测定。采用Agilent的ZorboxEclipseXDB‑C18(250×4.6mm，5μm)液相色谱柱；流动相A：0.5％甲酸溶液，流动相B：乙腈‑水(30:70)，检测波长为270nm；柱温20℃；流速0.8mL/min。梯度洗脱，0min时为100％的流动相A；15min时为88％的流动相A和12％的流动相B；21min时为82％的流动相A和18％的流动相B；60min时为31％的流动相A和69％的流动相B；65min时为100％的流动相B；70‑75min时为100％的流动相A。[0112] (4)总固体[0113] 蒸发干燥后，称量计算总固体含量。[0114] (5)不溶性微粒[0115] 参照2020版《中国药典》‑不溶性微粒检查法进行检测。[0116] 表1实施例1‑3的刺五加注射液质量检测结果[0117][0118] 表2对比例1‑5的刺五加注射液质量检测结果[0119]检测指标(200mL) 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4 对比例5pH 5.5 5.5 6.0 5.4 5.8总固体(mg/mL) 42 32 33 37 31≥10μm的微粒(粒) 790 640 1524 2108 3510≥25μm的微粒(粒) 152 193 240 283 307指纹图谱相似度 0.90 0.91 0.92 0.90 0.90总黄酮含量(mg/mL) 4.58 5.01 4.9 4.59 4.92紫丁香苷(mg/mL) 0.43 0.47 0.51 0.41 0.38刺五加苷E(mg/mL) 0.28 0.31 0.37 0.18 0.19[0120] 测试例2稳定性测试[0121] 1.澄明度观察测试[0122] 按照中国药典2005年版二部附录XIXC药物制剂稳定性试验指导原则的相关要求。[0123] 同一批刺五加提取物注射液，分别取500支实施例1‑3及对比例1‑5制备的刺五加提取物注射液，规格均为每支20mL，放置于综合药品稳定性试验箱(设备型号为LHH‑SSG)中于40±2℃下做加速试验，并分别于加速试验验1月、2月、3月、6月后在澄明度检测仪下观察每批产品的澄明度，测试结果如表3所示。[0124] 表3产品澄明度测试结果[0125][0126] 2.质量稳定性检测[0127] 同一批刺五加提取物注射液，实施例1‑3与对比例1‑5的刺五加提取物注射液(每支20mL)在40±2℃下放置3个月，然后采用测试例1中同样的检测方式对样品质量进行检测。检测结果如表4‑5所示。[0128] 表4实施例1‑3的刺五加提取物注射液3个月后质量检测结果[0129][0130] 表5对比例1‑5的刺五加提取物注射液3个月后质量检测结果[0131]检测指标(200mL) 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4 对比例5pH 5.3 5.2 5.4 5.3 5.3≥10μm的微粒(粒) 1725 2307 3098 1931 5717≥25μm的微粒(粒) 457 421 509 384 529总黄酮含量(mg/mL) 4.55 5.02 4.87 5.0 4.97紫丁香苷(mg/mL) 0.38 0.41 0.43 0.40 0.29刺五加苷E(mg/mL) 0.27 0.23 0.18 0.17 0.15[0132] 上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。

专利地区：黑龙江

专利申请日期：2023-10-07

专利公开日期：2024-07-12

专利公告号：CN117122625B